Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής (3) / Διάλεξη 28 / Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής - Τριανταφυλλίδης Αλέξανδρος (ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ, 2014)
Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής: Καλημέρα σας λοιπόν. Σήμερα συνεχίζουμε με τα εργαστήριά μας, τρίτο εργαστήριο σήμερα. Θα μας πεις Πινελόπι τι έχουμε να κάνουμε σήμερα και τι κάναμε μέχρι τώρα. Δεν οργανώθηκες μαζί με τους υπόλοιπους συμφετητές εδώ πέρα να σε βοηθήσουνε. Τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Κάναμε την προχώρηση. Ναι. Ποιος ήταν ο στόχος στην προηγούμενη βδομάδα. Ο βασικός στόχος του προηγούμενου εργαστηρίου ποιος ήτανε. Να απομονώσουμε το DNA. Στο προηγούμενο εργαστηρίο. Να δούμε να το κάνουμε σωστά. Ποιο. Αν είναι σωστό τα κομμάτια. Ο βασικός στόχος του προηγούμενου εργαστηρίου. Ναι. Ποιος το φωνάζει εκεί πέρα να το πει. Πες Ιρακλή. Ήταν η PCR. Ο βασικός στόχος. Μου είπες να κάνουμε. Ο βασικός στόχος ποιος ήταν. Μου είπες την ηλεκτροφόρηση. Δεν ήταν ο βασικός στόχος. Εντάξει. Αυτό. Το ψηλό είπες αλλά ήθελα το μόνο αυτό. Δεν ήθελα μόνο. Δεν ήθελα την ηλεκτροφόρηση. Η ηλεκτροφόρηση είναι ένας τρόπος να ελέγξεις την απομόνηση του DNA που κάναμε στο πρώτο εργαστήριο. Άρα σήμερα τι έχουμε να κάνουμε. Θα δούμε τα αποτελέσματα του προηγούμενου εργαστήριου. Δηλαδή τι. Τι είναι τα αποτελέσματα του προηγούμενου εργαστήριου. Θα δούμε την PCR. Θα δούμε την PCR. Και νομίζω ότι θα απομενώσουμε την απομόνηση του DNA. Συμφωνείτε. Αυτό είπατε εσείς να πείτε στην εκπρόσωπό σας. Το συζητήσετε καθόλου με την εκπρόσωπό σας. Προφανώς όχι. Καθίσατε την ώρα που έφυγα εγώ από εδώ πέρα και είπα στην Πινελόπη να σας εκπροσωπίσει, να συζητήσετε μαζί της τι έχετε να κάνετε. Όχι. Ξεκάθαρα όχι. Φαίνεται αυτό το πράγμα. Γιατί αυτή τη στιγμή η Πινελόπη που είναι το πρόσωπό σας δεν το έχει κάνει σωστά. Εγώ για αυτό τι σας ζήτησα. Να είστε σαν ομάδα. Πότε θα μάθετε να δουλεύετε λίγο σαν ομάδα, εντάξει. Πινελόπη δεν φταίσαι εσύ. Φταίνε όλοι μαζί εδώ πέρα. Γιατί όταν σας είπα κάτι, σας είπα να δουλέψετε σαν ομάδα. Ok. Ποιος θέλει να βοηθήσει λοιπόν την Πινελόπη. Τι έχουμε να κάνουμε. Πες Άννα. Σε αυτό το εργαστήριο τι έχουμε να κάνουμε. Απλά πράγματα. Να κόψουμε έντονο περιορισμού. Δεν έχουμε να κάνουμε να εστιαστούμε στο μετοχοδροιακό DNA αυτή τη στιγμή. Έχουμε το PCR μας, εντάξει. Το οποίο σήμερα θα το ελέγξουμε. Αλλά βασικά ο βασικός μας στόχος είναι να βάλουμε πέψι με κάποιο συγκεκριμένο έντονο περιορισμού. Το άλλο θα το κάνουμε αύριο. Εντάξει. Έγινε. Άρα λοιπόν εσείς έχετε να ελέγξετε το PCR και να βάλετε μια πέψι. Και στο ενδιάμεσο αυτό που θα κάνουμε, εφόσον σήμερα έχουμε να ασχοληθούμε με πέψις, και έχουμε να δούμε πώς δουλεύει η πέψι, θα κάνουμε μια άσκηση, η οποία πάντα αξίζει. Θα την κάνουμε στον πίνακα. Θα είναι παιχνίδια η άσκηση τέλος πάντων. Όπου θα δείτε ακριβώς τι σημαίνει ότι κόβουμε κάποιο έντονο περιορισμού. Και τι περιμένω να πάρω και τι βλέπω. Και μετά πώς αυτό που βλέπω το καταλαβαίνω. Θα το δείτε στην πράξη τι εννοούμε. Άρα έχουμε και λέμε, το πρώτο πράγμα που χρειάζεται να κάνουμε, είναι να κάνουμε μια ηλεκτροφόρηση. Λοιπόν, άρα είμαστε έτοιμοι να φορτώσουμε τώρα, εντάξει. Εκεί ακριβώς άφησα τα PCR προϊόντα σας. Φέρτε τα λίγο. Χρειαζόμαστε πάλι... Ε, δεν πειράζει. Όχι. Αυτά, θα τα πας λίγο στη πλανή αυτή, παρακαλώ. Λοιπόν, τι χρειαζόμαστε τώρα, για να φορτώσουμε. Χρωστικές. Κλείστε, κλείστε. Πες το. Τα σε είναι το 12.13, οπότε πάρτητα. Λοιπόν, τι κάνουν οι χρωστικές. Το μέτωπο της ηλεκτροφόρησης. Και η κλεικερόλη τι κάνει. Το τραβάει κάτω. Έγινε. Λοιπόν, χρωστική έχουμε εδώ πέρα. Μλάτερ έχουμε εδώ πέρα. Και μπορείτε να ξεκινήσετε. Θέλω ένα άτομο, το οποίο θα κρατάει σημείως για το ποιος φορτώνει. Και μετά οι υπόλοιποι έρχεστε. Ένας από κάθε ομάδα που δεν έχει φορτώσει πιο πριν, να φορτώσει. Λοιπόν, μέχρι τώρα. Σήμερα δεν κάναμε πολλά διαφορετικά πράγματα από ό,τι έχουμε κάνει. Απλώς ετοιμάσαμε μια ηλεκτροφόρηση. Περιμέναμε ένα πήξι. Και τώρα έχουμε βάλει να ελέγξουμε το PCR προϊόν μας. Το μόνο στάδιο που θα κάνουμε, αφού δούμε πια το στάδιο του PCR, είναι να βάλουμε και την πέψι. Το σημαντικό για σήμερα, για να μάθετε και να καταλάβετε, είναι τι σημαίνει όταν βάζω μια πέψι με ένα έντυμα περιορισμού. Γιατί έχετε συζητήσει, έχουμε συστήμη τα έντυμα περιορισμού, ας πούμε. Το ξέρετε. Ναι. Έντυμα που παράγονται στις εισαγωγικά βαθμίδια για την αμυνά τους, εκεί κόβονται συγκεκριμένες πέσεις στο... Έντυμα τα οποία τα παράγονται συνήθως στα βακτήρια, τα οποία τα χρησιμοποιούμε και τα οποία αναγνωρίζουν στις συγκεκριμένες αλληλουχίες και κόβονται σε αυτή τη συγκεκριμένη τη θέση. Και εμείς τα χρησιμοποιούμε στη γενετική μηχανική. Με έντυμα περιορισμού, έχετε δουλέψει μέχρι τώρα? Έχετε βάλει πέψι μέχρι τώρα? Πού? Στη Μωριακή Βιολογία? Στη γενετική ανθρώπου βάλατε πέψι? Όχι. Πάμε και στη γενετική μηχανική. Τα έντυμα περιορισμού, αυτά που χρησιμοποιούμε και μπορούμε να πάρουμε πολλές πληροφορίες σε πάρα πολλές περιπτώσεις, και ειδικά στο παρελθόν που δεν είχαμε δυνατότητα να κάνουμε τόσο φθηνή αλληλούχιση, ήταν να βλέπουμε τον πολυμορφισμό. Πέρα από οτιδήποτε άλλο μπορούμε να το χρησιμοποιήσουμε στη γενετική μηχανική, τα έντυμα περιορισμού είναι ένας τρόπος έμεσος, ως ένα βαθμό, για να μελετήσουμε τον πολυμορφισμό στους πληθυσμούς. Πολυμορφισμός υπάρχει. Το έχουμε συζητήσει. Και ακριβώς επάνω στον πολυμορφισμό είναι που βασιζόμαστε να κάνουν ηχνηλασσιμότητα. Μπορούμε να ψάξουμε, δηλαδή, με βάση τους διαφορετικούς πολυμορφισμούς, τις διαφορετικές μεταλλάξεις που υπάρχουν στο DNA διαφορετικών ειδών, να ψάξουμε έναν τρόπο ώστε να παίρνουμε διαφορετικά πρότυπα. Άρα, λοιπόν, θα κόψουμε ένα ενισμό περιορισμού και ανάλογα με το διαφορετικό πρότυπο που θα βρούμε, το οποίο βασίζεται στη διαφορετική αλληλουχία που μπορεί να έχουν διαφορετικά είδη, θα πάρουμε ένα διαφορετικό πρότυπο και πότε, λοιπόν, θα το γνωρίσουμε μετά. Σήμερα, αυτό που θέλω να δούμε, θα το κάνουμε με μια άσκηση στον μαυροπίνακα, είναι ακριβώς τι σημαίνει ότι κόβω μια αλληλουχία με ένα ενισμό περιορισμού, τι περιμένω να δω, πώς την περιμένω αυτό το ενισμό να κόψει, πώς περιμένω να βρω αυτό το αποτέλεσμα σε μια ηλεκτροφόρηση και να καταλάβω, λοιπόν, όλη τη διαδικασία, τι σημαίνει ότι κόβω ένα ενισμό περιορισμού. Για να το κάνουμε αυτό, θα κάνουμε, είπαμε, μια άσκηση παιχνίδι, οπότε θέλω, αναομάδα, θέλω έναν εφευρέτη, πώς είστε, είστε 4, 4, 4, παντή για 5 εδώ πέρα κάποιος θα πάει σε αυτή την ομάδα για να είναι 4 και 4 εδώ πέρα, εδώ είστε 5 και εδώ είστε 3, σωστά. Άρα θέλω, ο Βλαδίμηρ πήγαινε από εκεί. Άρα είμαστε OK. Έναν εφευρέτη, έναν ελεγκτή, έναν κόπτη και έναν φορτοτή. Αποφασίσετε λίγο μεταξύ σας ποιος θα είναι το κάθε τι. Δεν θα σας πω τι χρειάζεται με τη διέστησή σας ό,τι θέλετε. Όλοι ξέρετε ποιος είναι ο ρόλος σας σήμερα σε αυτό το εργαστήριο. Λοιπόν, αυτό που θα κάνουμε λοιπόν είναι θα δούμε τι σημαίνει το ότι κόβουμε κάποιο ένθρωπο, περιζούμε κάποια αλληλουχία. Θα ξεκινήσουμε εφευρίσκοντας μια αλληλουχία. Άρα λοιπόν αυτό που θέλουμε να κάνουμε είναι όταν γράφουμε τις αλληλουχίες, ήδη έχετε αρχίσει να συνηθίζετε ότι τις γράφουμε με ένα συγκεκριμένο τρόπο, ώστε να μπορούμε μετά να κάνουμε και alignment, να τις κάνουμε στήχιση τη μια αλληλουχία κάτω από την άλλη. Άρα λοιπόν εγώ θα πάρω μια αλληλουχία που είναι 40 βάσεις. Άρα θα έχω, ας πούμε... Όχι, όχι, όχι. Λοιπόν, ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έξι, εφτά, οχτώ, εννέα, δέκα. Ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έξι, εφτά, οχτώ, εννέα, δέκα. Ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έξι, εφτά, οχτώ, εννέα, δέκα. Τι το A? Τριάντα. Τριάντα. Α, το A, εννοούσατε. Ok, το έπιασα. Εντάξει. Λοιπόν, ξεκινάμε με αυτό. Θέλω ένα άτομο από κάθε ομάδα να έρθει και να γράψει από εδώ κάτω μια αλληλουχία δικιά του. Τον εφευρέκτη σας χρειάζομαι. Εγώ θα είμαι, ας πούμε, το χ, και έχουμε ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έξι. Θέλω ο τρόπος που θα γράψετε αυτές τις αλληλουχίες να είναι στοιχισμένος. Άρα δεν θα μου τις γράψετε A, A, A, A, A, ας πούμε, εντάξει. Θέλω ένα νουκλωτίδιο κάτω από κάθε νουκλωτίδιο. Ομάδα 1. Ναι, εφευρέτης είσαι. Μέχρι το 40, 40 νουκλωτίδια θέλω να είναι. Όλοι προσέχετε τον εφευρέτη, το ότι γράφει στιχισμένες τις αλληλουχίες. Μπορούμε να θεωρήσουμε ότι αυτές οι αλληλουχίες με τις οποίες δουλεύουμε αυτή τη στιγμή, είναι αλληλουχίες από 7 διαφορετικά είδη. Δεν τις ξέρουμε, αλλά απλώς αυτή τη στιγμή τις γράφουμε, εμείς θα δούμε μετά τι εννοούμε. Θέλω να εφεύρεται ωραίες αλληλουχίες. Αλληλουχίες. Καλύτερες από τους δικές μου, αυτός θα πει, όμορφοι αλληλουχίες. Λοιπόν, ομάδα 2. Μας άρεσε αυτή, μας άρεσε. Λοιπόν, ομάδα 2. Αλληλουχίες. Αλληλουχίες. Τι με κοιτάς. Εδώ, την ομάδα σου. Αν η ομάδα σου είναι κανοπημένη. Είσαι πολύ κανοπημένη ομάδα σου, οπότε επόμενος. Η στίχηση δεν είναι κι εύκολο πράγμα, οπότε θέλω λίγο να... Είμαστε οκέι, ομάδα 3. Είμαστε πολύ οκέι. Είναι στοιχισμένα, καλά. Next. Next. Αυτή είναι η αριστερία. Αυτή είναι η αριστερία. Άλλος, ομάδα 6. Αυτή είναι η αριστερία. Λοιπόν. Τώρα θα μου δώσετε λίγο χρόνο ημένα. Λοιπόν, δούμε. Λοιπόν. Λοιπόν. Και τώρα έρχεται η ώρα να κόψουμε τα ένισμα περιορισμού μας. Τα ένισμα περιορισμού που θα χρησιμοποιήσουμε είναι τα εξής πέντα ένισμα. Τα οποία είναι ένισμα, λοιπόν. Αυτή είναι η αριστερία. Λοιπόν. Έρχομαι λοιπόν εγώ τώρα και αυτό που πρέπει να κάνω είναι να δω το κάθε ένισμα από αυτά τα οποία έχω επιλέξει. Που κόβει ακριβώς επάνω στην αλληλουχία μου και... Δεν έχω. CCA δεν έχω. GTA που έχω και δεν το βλέπω. CCG δεν έχω. TTCA εδώ είναι λοιπόν. Άρα αυτό που έχουμε, έχουμε 0, 0, 0, 0, 1. Έγινε. Ελάτε το επόμενος τώρα να δούμε τι γίνεται με εσάς. Όχι, πάμε πάντα στην κατέυση 5 προς 3. Επέλαξε επίτηδες τέσσερα ένισμα περιορισμού, τα οποία να κόβουν σε τρίνου κλωτίδιου, να γνωρίζουν αλληλουχία τριών κλωτιδίων. Και ένα ένισμα περιορισμού, το οποίο να κόβει τέτρανου κλωτίδιου. Έρχεστε λοιπόν ο ελεγκτής και ελέγχει πάνω στην αλληλουχία που υπάρχουν αυτές οι θέσεις κοπής για τα διάφορα ένισμα. Άμα θέλεις τράδα και λίγο πιο κόκκινα πιο κάτω τη γραμμή να φαίνεται καλύτερα που κόβουν. Και κάνε και σε εμένα λίγο εκεί πάνω το TTA. Για το κάθε ένισμα που βρίσκεις πες και πόσες θέσεις κοπής υπάρχουν. Άρα και το TTA έχει συνολικά δύο θέσεις κοπής. Έχεις TTA εκεί πέρα, ένα TTA, άρα έχεις μια θέση κοπής. Μας μπαράλια το δικό σας το DNA. Μια πάνω στην άλλη. Θα κόψει και τα δύο θα κόψουν. Μην το ψάχνεις. Αυτή είναι η θέση. Αυτή είναι η θέση. Αυτή είναι η θέση. Ωραία. Αυτή είναι η επόμενη. Να βλέπω λίγο εγώ και πώς πάει και η ηλεκτροφόρηση. Αυτή είναι η θέση. Αυτή είναι η θέση. Εικανοποιημένη και η ομάδα τρία που έκοψαν τα ένιζε με αυτά. Αυτή είναι η θέση. Σας φέκα καλά ένιζμα τελικά. Πάρα πολύ καλά ένιζμα. Ωραία. Ευχαριστούμε Γιώργο. Έλα ο επόμενος. Η ομάδα πέντε δεν βλέπει. Η ομάδα πέντε να ελέγχει λίγο τον δικό της. Σας ξέφυγε. Ναι, πρέπει να ελέγχετε και τον ελεγκτή. Ευχαριστούμε την ομάδα ένα που βοήθησε την ομάδα πέντε. Όχι, το GTA ψάχνει τώρα. Το GTA δεν έχει, όχι. Πάμε στο επόμενο. Ωραία. Ωραία. Α, έλα και ο τελευταίος και να δούμε μετά. Να δούμε και την τελευταία ομάδα. Μακάδωρος. Ωραία. Είμαστε και με τις ελουχίες. Ή θέλετε να το παίξουμε με τα λαξιγόνως παράγοντας και να δημιουργήσουμε μία αυτόματη μετάλλαξη να αποκτήσει και άλλες πέπεις. Καλά είμαστε και έτσι. Η αλήθεια είναι ότι όλοι γενικά με αυτά τα ένισμα που βρήκα, όπως προσπαθούσα, όπως καταλαβαίνετε, να έχω σε όλους σας να υπάρχουν κάποιες θέσεις περιορισμού, πήραμε αυτά τα αποτελέσματα. Τώρα, αυτά τα ένισμα σκεφτείτε ότι αυτή τη στιγμή, εδώ το κάνουμε στο μαυροπίνακα, αλλά ταυτόχρονα σκεφτείτε ότι αυτό που κάνουμε εδώ πέρα γίνεται και στην πραγματικότητα. Άρα στην πραγματικότητα τι γίνεται. Έχουμε το σωλινάκι μας, όπου έχουμε τις ελουχίες μας, τον DNA μας, έχουμε βάλει τα ένισμα μας και τα ένισμα, αυτά με το που τα βάζουμε, μπαίνουνε, ψάχνουνε να βρουν αυτές τις ελουχίες οι οποίες τις αναγνωρίζουνε. Και όπου αναγνωρίζουνε, κόβουνε. Ποιο είναι το αποτέλεσμα, λοιπόν, αυτό που κάνουμε, υποτίθηκαν μια τέλεια πέψι, όχι μερική πέψι. Ποια είναι η διαφορά της τέλειας και της μερικής πέψις. Στην τέλεια δεν προλαβαίνουνε τα ένισμα να κόψουν. Δεν τα αφήνουμε, ας πούμε, και ολόκληρο το βράδυ να αφήσουμε μισθόρα τη δικιά σας την πέψι, μπορεί να την αφήσουμε μόνο για 5-10 λεπτά. 5-10 λεπτά σημαίνει, ας πούμε, ότι εφόσον, ας πούμε, στην ομάδα 6 εδώ πέρα που έχουμε αυτή την αλληλουχία, άμα τα αφήνουμε για 5-10 λεπτά, σκεφτείτε ότι δεν έχουμε μόνο ένα μόριο, έχουμε πολλά αντίγραφα του ίδιου μωρίου, μπορεί σε αυτά τα 5-10 λεπτά να μην προλάβαινε να κόψει καθόλου, να έκοβε μόνο στη μια θέση, να έκοβε μόνο στην άλλη τη θέση και να παίρνουμε λοιπόν του κόσμου τις διαφορετικές αλληλουχίες μετά από το προϊόν της πέψις, αλλά εμείς αυτή τη στιγμή ποτέ θα τα αφήσουμε να τρέξει όλο το βράδυ, άρα λοιπόν σίγουρα έχουν κόψει καλά, άρα λοιπόν περιμένουμε πιο όταν έχουν κόψει καλά να δούμε τι θα πάρουμε, θα πάρουμε έναν αριθμό τμήματων με ένα συγκεκριμένο αριθμό ζωνών. Άρα λοιπόν σε εμένα αυτό που θα πάρω είναι ότι θα πάρω δύο όλο και όλο τμήματα με μέγεθος 12 βάσεις και 28 βάσεις. Το ίδιο θέλω τώρα ο κόπτης από κάθε ομάδα να έρθει να γράψει πόσα τμήματα τελικά παίρνουν από αυτή την πέψι και τι μεγέθια έχουν αυτά τα τμήματα. Και εδώ πέρα θα αρχίσουμε να βλέπουμε κάποια πράγματα που τα ξέρετε στη θεωρία, δείτε στην πράξη και θα σας εξηγήσω σε λίγο. Με τη σειρά που τα βλέπεις μην προσπαθείς να τα γράψεις με αυξάνοντος μεγέθους. Τώρα εκεί πέρα δεν θα σου χωρέσει βέβαια, αλλά θα το κάνεις με πιο μικρά γράμματα για να χωρέσει. Ωραία. Σωστός ο Θανάσης. Λοιπόν, τώρα. Σωστός είναι? Είναι σωστός. Γιατί είναι σωστός? Κοιτάξτε λίγο τώρα εδώ πέρα και θα το δείτε και τις επόμενες φορές που θα το κάνουμε. Έχουν προκύψει έξι κομμάτια. Πόσες θέσεις κοπής είχαμε? Πέντε θέσεις κοπής. Είναι αυτό που λέμε. Για όσες θέσεις κοπής, για νη θέσεις κοπής, παίρνουμε πάντα νη συν ένα τμήματα. Άρα εγώ είχα μία θέση κοπής, πήρα δύο τμήματα. Η ομάδα 1 είχε πέντε θέσεις κοπής, πήρα έξι τμήματα. Και το ίδιο θα το βγάλουμε και όλοι οι πόλτες. Θα το δείτε σιγά σιγά. Και είναι ένας τρόπος να ελέγξεις ότι το κάνεις σωστά. Και επίσης όσον αφορά τα τμήματα που έχει βάλει, είναι σωστά αυτά τα τμήματα, ποιος είναι ο εύκολος τρόπος με τον οποίο μπορούμε να είμαστε σίγουροι ότι είναι σωστός. Παίρνεις το άθρησμα και πρέπει το άθρησμα να σου βγάζει πάντα το συνολικό το μέγεθος. Έγινε? Κλασικά το ξέρετε, αλλά τώρα και το βλέπετε κιόλας. Πάμε στην ομάδα 2. 2 θέσεις σκοπής, 3 τμήματα θα πάρουμε. 11, 4, 25 μας κάνει 40. Άρα 5 τμήματα. 2, θα τα μετρήσεις. Αλλά για τη μέτρηση επίσης μπορεί να σε βοηθήσει και το αλάινμεντ, δεν χρειάζεται να το φτάσεις. Κανονικά αυτό δεν πρέπει να είναι το 1, 2, 3, 4, 5, 6, μετά μένει 26. Σωστά είναι, καλά το λέμε. Μέχρι εδώ πρέπει να είναι το 20 και τα υπόλοιπα μετά λέει 20. 26, καλά είμαστε, καλά βγαίνει το άθρισμα. Ναι, 26 βγαίνει. Έλα ομάδα 4. Βλέπετε επίσης την τυχαιότητα των θέσεων. Γιατί αυτόν, όταν κόβεις με έναν έντονο περίπου, δεν ξέρεις που θα σου κόψει. Στην ομάδα 3 έκοψαν κυρίως στην αρχή και έμεινε ένα μεγάλο κομμάτι στο τέλος. Στην ομάδα 1 είχαμε δύο μεγαλύτερα κομμάτια. Ένα στην αρχή, ένα στη μέση και μετά διάφορα μικρά. Δεν το ξέρεις εξ αρχής που θα είναι αυτά. Είναι τυχαιότητα και επικοιλότητα συναφορά την αλληλουιχία DNA. Σας παιδεύω λίγο εκεί πέρα. Έλα και η ομάδα 5. Όχι. Ποιο? Γιατί ακριβώς σκέψου ότι έχεις μια αλληλουιχία, την οποία θα την κόψεις ενδιάμεση σε κάποια κομμάτια, πάντως περισσεύει και ένα κομμάτι παραπάνω. Είναι μη θέση κοπής, μη συνένα κομμάτια. Άμα ήταν κυκλικό DNA δεν θα έβγαινε έτσι, αλληλουιχία είναι γραμμικό DNA βγαίνει έτσι. Ωραία, έγινε. Και κάτι άλλο που ήθελα να σας πω είναι ότι πήραμε τυχαία κάποια ένζιμα. Εντάξει, άμα βρούμε στο σύνολο πόσες τέσσερις κοπής έχουμε, εδώ πέρα έχουμε 2, 3, 4, 5, 6. Εδώ πέρα έχουμε 1, 2, 3, 4. Εδώ έχουμε 1, 2, 3, 4 τέσσερις τέσσερις κοπής. 1, 2, 3, 4, 5. 1, 2. Συγκρίνεται τα 3 νουκλωτίδια με το 4 νουκλωτίδιο. Και έτυχε αλλά και δεν ήταν τυχαία αυτό το πράγμα. Δηλαδή ότι όντως πιο δύσκολο είναι να βρεις μια αλληλουιχία 4 βάσεων παρά μια αλληλουιχία 3 βάσεων. Γι' αυτό και βεβαίως λιγότερες θέσεις κοπής έχουμε κατά μέσο όρο σε αυτό το ένζιμο κοπής παρά σε αυτά τα κομμάτια. Έγινε. Κόψαμε το DNA μας πια. Έχουμε βρει τα κομμάτια τα οποία πια κυκλοφορούν και κολυμπάνε μέσα σε αυτό το τζελ. Μέσα σε αυτό το διάλειμμα αντίδρασης. Τι χρειάζεται να κάνουμε τώρα? Να τα ηλεκτροφορήσουμε. Χρειάζεται κάποιον να τα φορτώσει. Άρα ξεχνάμε αυτό πια και έρχεται η ώρα της ηλεκτροφόρησης. Τι χρειάζεται? Χρειαζόμαστε την ηλεκτροφόρηση μας, τα τσεπάκια μας, στα οποία θα φορτώσουμε. Εδώ θα βάλουμε το λάντερ, τον 100 bp. Δεν θα είναι 100 bp, θα είναι 10 bp. Αντίστοιχα μπορείτε να φανταστείτε ότι δεν θα έχουμε τέτοια κομμάτια. Σκεφτείτε ότι μπορεί να είχαμε κομμάτια όχι 40 βάσεων αλλά 400 βάσεων και πολλαπλασιάστε επί 10. Θα σας εξηγήσω γιατί. Εδώ θα βάλουμε το ACOPON DNA και εδώ θα βάλουμε τα αδείγματά μας να τα φορτώσουμε. Βάζουμε τα αδείγματά μας να τα φορτώσουμε, τρέχει η ηλεκτροφόρηση, ανοίγουν οι βάσεις οπότε μετά θα προσπαθήσουμε να βάλουμε πόνο σε αυτή την ηλεκτροφόρηση που ακριβώς θα βρίσκονται όλα αυτά τα κομμάτια. Ο lander function θα ανοίξει έστω ότι θα έχουμε εδώ πέρα το 40, εδώ το 30, εδώ το 20, εδώ το 10. Μια αντίστοιχα 100 bp lander εντάξει, 100, 200, 300, 400. Το ACOPON DNA 40 βάσεις, άρα θα το δούμε εδώ τη ζώνη. Και εγώ μετέχω να βάλω το δικό μου το DNA που θα βρίσκεται, 2 ζώνες, η μια στα 28 και η μια στα 12. Για έλατε τώρα εσείς να βάλετε τα δικά σας για να δούμε κάποια ωραία ενδιαφέροντα στοιχεία εδώ. 6 ζώνες. Εδώ πέρα πια μπορείς να τις βάλεις με βάση το μέγεθος, ναι. Τώρα υποθετικά βεβαίως σε μια ηλεκτροφόρηση μια ζώνη 5 βάσεων, 3 βάσεων, 2 βάσεων και τα λοιπά δεν θα μπορείτε να δείτε. Γι' αυτό σας λέω, έστω ότι πείτε ότι είναι επί 10, που και πάλι μια ζώνη 20 βάσεων δεν βλέπουμε, αλλά τουλάχιστον υποθετικά θα τη δούμε. Μπορεί να μην τη βλέπαμε, αλλά σίγουρα θα υπήρχε σε αυτό το τζέλ. Βλέπω όπως βολεύεσαι. Θα πρέπει να βάλεις μια ζώνη 13 βάσεων και μια ζώνη 12 βάσεων. Εντάξει, καλά είσαι, καλά είσαι. Βεβαίως σε μια ηλεκτροφόρηση αγαρώζεις σίγουρα μια ζώνη 13 βάσεων και μια ζώνη 12 βάσεων δεν πρόκειται να έχει τη διακριτική ικανότητα του αγαρώζ να σας διαχωρήσει. Εμείς θα υποθέσουμε ότι μπορεί να διαχωριστεί. Άρα τι θα κάνουμε εκεί πέρα, εδώ σας θέλω. Θα κάνω μια διπλή ζώνη, πιο έντονη ζώνη. Ok, ωραία. Γιατί η 13 με τη 12 να πούμε ότι διαφέρει, η 5 με την 5 όμως με τίποτα δεν μπορεί να διαφέρει, θα πέσει μια πάνω στην άλλη. 11, 14 και 25. Επαναλαμβάνω σε μια αγαρώζη σίγουρα δεν μπορεί να υπάρχει τόσο μεγάλη διαφορά, ώστε να μπορούμε να τα διακρίνουμε. Μαρία δεξιά. Είσαι η ομάδα 2, άρα ναι. Κανονικά πρέπει να το βάλεις κάτω από τα 2, στην ίδια στήλη. Μαρία τώρα εκεί πέρα που το βάλεις, το έχεις βάλει στην ίδια ευθεία με το 13, δεν πρέπει να πάει λίγο πιο κάτω και από το 12 και λίγο πιο πάνω από το 10. Έχεις δηλαδή το 12, έχεις το 10, πρέπει να είναι κάτω από το 12 και πάνω από το 10. Ποιος θα πάει στη Μητρία να πει στον Κώστα, άμα δεν έχει τελειώσει τη δικιά τους ηλεκτροφόρηση να αφήνει να την πάρει και τη δικιά μας. Πες ότι ρωτάμε τι θα γίνουμε με την ηλεκτροφόρηση, εντάξει. Εκεί λίγο πιο πάνω το έβαζε στο 4, καλά θα είναι, γιατί είναι 3 και 4 ανάμεσα στο 3 και στο 5, λίγο πιο πάνω θέλει. Εντάξει. Στη γενετική μηχανική θα σας βάλουν μια άσκηση η οποία θα πρέπει να καταλάβετε τις θέσεις σκοπής με βάση αυτό το πρότυπο. Είναι λίγο αντίστροφη η άσκηση. Επίσης, αύριο στο τελευταίο αποτέλεσμα, στο τελευταίο εργαστήριο, θα θελήσουμε να δούμε πώς με βάση επίσης ένα πρότυπο που παίρνουμε από ζώνες, μπορούμε να καταλάβουμε πράγματα όσον αφορά τις θέσεις σκοπής. Άρα λοιπόν, απλώς εμείς θα τον προσεγγίσουμε με τη λογική, με βάση αυτές τις θέσεις σκοπής να καταλάβουμε και τη φιλογέννηση ή οτιδήποτε, ενώ στη γενετική μηχανική θα θέλετε να κάνετε απλώς χαρτογράφηση. Έλα, επόμενος. Εντάξει. Εδώ, εδώ, εδώ, όχι, τον μαύρο μαρκαδόρου θέλουμε, ναι, ο μπλε που πήγε. Ποιος τον έχει, εγώ τον έχω μάλλον, ναι, εδώ τον έχω. Εντάξει και το 26άρι, εκείνο θα μπορούσε να είναι λίγο πιο χαμηλά σε σχέση με το 25άρι, αλλά ok. Όχι, το 25άρι θα μπορούσε να είναι λίγο πιο ψηλά. Πάλι επαναλαμβάνω το ότι βεβαίως τέτοια μικρά κομματάκια δεν θα μπορούσαμε να δούμε με τίποτα, αλλά... Πιο χαμηλά, πιο χαμηλά, πιο χαμηλά, πιο χαμηλά, 10, 11, λίγο πιο κάτω. Ωραία. Και το 7άρι υπάρχει, αλλά θα βάλω το στην ίδια ευθεία. Εντάξει, έλα πάμε, επόμενη. Έναν άσο, ένα 6άρι, ένα 7άρι και ένα 26άρι. Το 6άρι μόνο είναι. Ναι δίπλα, διπλή γραμμή, όχι διπλά εντώνη γραμμή. Ξεχωριστές γραμμές κάνετε, ξεχωριστές. Ωραία, έγινε. Και 26άρι. Απλώς λίγο Αλεξάνδρα, άμα δεις τα δείγματά σου, της διόνες σου, δεν είναι στην ίδια στήλη. 26 είναι πολύ αριστερά, το 7 είναι πολύ δεξιά και ο άσος είναι πάλι πολύ αριστερά. Άστε και εκείνα θα τα φτιάξω, απλώς τουλάχιστον τα δικά σου τα δείγματα να είναι στην ίδια ευθεία. Βάλα εδώ έτσι, τράβα το, ναι, εντάξει. Έλα και ο τελευταίος. Πέρα μου, πέρα μου τον μακαδοραυτόνα. Θα υποθέσουμε ότι έχουμε έτσι, έχει... Ναι, τα πάνω θα αλλάξω και βέβαια τα πάνω θα αλλάξω, εγώ μην παιδεύομαι τώρα να αλλάξω το... Ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έλα και το έξι εδώ πέρα. Εντάξει, λοιπόν, για δείτε τώρα. Άρα εσείς, άμα δεν είχατε βεβαίως καμιά πληροφορία για την αλληλουχία και απλώς πέρατε το DNA, το κάνατε πέψι, θα πέρατε κάτι τέτοιο. Αυτό όμως, με το που το έχετε κάνει αυτό, έχετε κάνει μια βάση δεδομένων, όπου υποθετικά, βέβαια, άμα κάναμε πολλά άτομα από το είδος X, από το είδος ένα, δύο, τρία, τέσσερα, πέντε, έξι, και πέραμε πάντα το ίδιο πρότυπο, τι θα ξέραμε. Θα μπορούσαμε πια να συγκρίνουμε και να ταυτοποιήσουμε και να ξέρουμε, άμα κάνουμε πέψι, ολική, και με όλα μαζί αυτά τα ένεισμα, που σίγουρα βέβαια χρειάζεται να κάνουμε μόνο με ένα ένεισμα, αλλά σας λέω και με όλα τα ένεισμα, και παίρνουμε πάντα ένα τέτοιο πρότυπο, 28 βάσεις και 12 βάσεις που λέει ο λόγος, τότε κατευθύν το συνδέουμε αυτό το πρότυπο με αυτό το είδος. Άρα έχουμε κάνει μια βάση δεδομένων. Αυτό που έχει σημασία για εσάς επίσης είναι το τι. Αν προσπαθήσετε, επίσης δεν ξέρετε στην πραγματικότητα τι γίνεται εκεί πέρα, αλλά βλέπετε αυτό και μόνο. Υπάρχουν περιπτώσεις, όπως θα πούμε, θα πεις ότι έχω μια ζώνη 400 ή 40 βάσεις, εγώ πολλοπροστασιάζω επί 10. Κι έστω ότι παίρναμε αυτό το πρότυπο εδώ πέρα και είχαμε μια ζώνη, παραλαμβάνει υποτίθεται ότι έχουμε 400 βάσεις έχουμε ξεκινήσει, 110, 90, 70 και 40, 11 και 9, 20, 27, 31. Άρα αυτό 31, 310 βάσεις. Άμα το βλέπαμε μόνο αυτό, μόνο τις ζώνες, θα μπερδευόμασταν, θα μας έλειπε κάτι. Γιατί συνήθως δεν έχετε συνηθίσει να βλέπετε ζώνες και να σκέφτεσαι μήπως υπάρχει καμιά διπλή ζώνη. Θα βλέπατε μια ζώνη εδώ, μια ζώνη εδώ, μια ζώνη εδώ, μια ζώνη εδώ, θα τις αθρίζατε και δεν σας έβγαζε το άθρισμα 40 ή 400. Εκεί θα έχετε πρόβλημα. Εκεί είναι που σκέφτεσαι, άμα το άθρισμα δεν μου βγαίνει όσο το μη κομμένο συνολικό PCI προϊόν, μήπως έχω καμιά διπλή ζώνη και μου ξεφύγει. Αυτό είναι το πρώτο που θα σκεφτείτε. Βέβαια σε πολλές περιπτώσεις μπορεί να σας λείπουν και μερικά κομματάκια, επειδή ακριβώς είναι πολύ μικρά και δεν τα βλέπετε έτσι κι αλλιώς. Και αυτό δηλαδή σας ψηλιάζει. Αλλά είναι ακριβώς η σημασία ότι σε μια ΨΠΕΠΣΙ μπορεί να έχεις και διπλές ζώνες όπως και εσείς έχετε, οι οποίες δεν φαίνονται με το πρώτο η ματιά, αλλά τις καταλαβαίνετε όταν παίρνετε το άθρισμα. Έγινε, ναι. Αν θα σου πω 90 και 92. Δεν θα φαίνονταν διαφορά. Δεν θα φανούν διαφορά. Δηλαδή κανονικά τώρα όλες αυτές, αυτό θα ήταν μια ζώνη. Μη σου πω και αυτό μπορεί να ήταν και μια ζώνη. Εντάξει, και αυτό θα ήταν μια ζώνη. Εκεί είναι το δύσκολο. Αυτό είναι οι αδυναμίες των συστημάτων ΠΕΠΣΙΟΝ όπου βλέπεις μόνο μια ηλεκτροφόρηση. Γι' αυτό είμαστε πολύ καλύτερα πια που έχουμε τις αλληλουχίες, οπότε με βάση στις αλληλουχίες δεν έχουμε το ίδιο θέμα. Παλιά όμως είχαμε αυτό το πρόβλημα. Δηλαδή θα παίρναμε ζών... εδώ τι θα παίρναμε, θα παίρναμε ένα τέτοιο πράγμα. Θα παίρναμε δηλαδή μια ζώνη εδώ, μια ζώνη εδώ και μια ζώνη εδώ. Εδώ θα ψηλιαζώσουν κάποια στιγμή ότι αυτή η ζώνη είναι διπλή, τριπλή, δεν ξέρω τι. Θα έπρεπε να κάνεις λίγο στο μυαλό, σου θέλει και λίγο εμπειρία, τους δυνατούς συνδυασμούς μέχρι να βρεις αυτό το άσχημα σου βγάζει 40. Αλλά παρόλα αυτά αυτό είναι και πολύ υποκειμενικό κάποιες φορές και μπορεί να γίνονται σαν λάθη. Αυτό λοιπόν από εδώ ξεκινάμε, επαναλαμβάνω, όταν κάνεις έναν έλεγχο σε οποιοδήποτε είδος, για να βρεις το πρότυπο και με βάση αυτό το πρότυπο να καταλάβεις τελικά ποια είναι η υπέπιση, ποια είναι η θέση κοπής. Αύριο αυτό ακριβώς θα κάνουμε, θα προσπαθήσουμε, θα έχουμε ασκήσεις που είναι μέσα στο φυλάδιό σας, όπου θα σας δώσω, βασικά όχι μια ηλεκτροφόρηση, θα σας δώσω αυτό, ότι έχουμε πάρει αυτά τα κομμάτια και με βάση αυτά τα κομμάτια θα προσπαθήσετε να βρείτε τι θέση κοπής είχαμε πάνω σε αυτές τις λουχίες. Αυτό είναι για αύριο. Τώρα, τελειώνουμε με αυτό, η ηλεκτροφόρηση μας έχει τελειώσει, πάω να τη βγάλω μια φωτογραφία να δούμε τι πίεση άκροι μου πήρατε και μετά βάζουμε την πεπς και τελειώσατε. Εντάξει, πέντε λεπτάκια διάλειμμα. Βλέπουμε όλοι ή είμαστε όλοι γύρω από κάποιον που να έχει μια φωτογραφική μηχανή. Πώς τα φορτώσαμε? Έχουμε φορτώσει έξι διαφορετικά δείγματα και μετά έχουμε φορτώσει το λάντερ. Ο λάντερ όπως βλέπετε, ποια είναι η ζώνη αυτή που βλέπετε κάτω κάτω, η εκατοστάρα, σωστά. Αν ξεκινήσεις δεξιά, δεξιά είναι ο λάντερ, τον βλέπετε όλοι. Ξεκινάς από κάτω προς τα πάνω, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1.000 και μετά 1.250, 1.500. Εδώ φαίνεται ξεκάθαρα ο λάντερ, αλλά αν έχουμε βάλει λίγο λιγότερο λάντερ μπορεί να μπερδευόμαστε όσον αφορά το ποια είναι η εκατοστάρα ζώνη. Για να μην μπερδευόμαστε αυτό που κάνουμε στο λάντερ είναι, και αυτό είναι σημαντικό, πάντα η 500 και η 1.000 σε αυτόν τον συγκεκριμένο τον λάντερ είναι πιο έντονη. Άρα ακόμα και άμα δεν βλέπουμε την εκατοστάρα, βλέπετε ότι η 500 και η 1.000 είναι πιο έντονη. Άρα δεν τη μετράμε πάντα το λάντερ από κάτω προς τα πάνω, ψάχνουμε να βρούμε το 500 και το 1.000 και προσανατοιληζόμαστε με βάση αυτό. Εντάξει, το καταλάβατε όλοι. Άρα το PCR προϊόν που πήραμε, γενικά όπως βλέπετε, έχουμε πάρει PCR προϊόν πάνω από τα 1.000 σε ποιες ομάδες, στην 1 στη 2. Τρία, τέσσερα δεν πήραμε πάνω από τα 1.000, δεν δούλεψε, στην τέσσερα και στην πέντε, σωστά. Η 1 και η 2... Σάσου, λάθος είπα, στην πέντε και στην έξι. Η τρία, τέσσερα δεν δούλεψε, πήραμε μόνο μια αχνή ζώνη κάπου στα 600. Τώρα, η 1, η 2 και η 6 πήραμε πολύ ποσότητα PCR προϊόντος, εντάξει. Η 2 είναι το καλύτερο μεν, γιατί σχεδόν δεν πήραμε καμιά άλλη μη ειδική ζώνη. Η 1 πήραμε και κάποιες ειδικές ζώνες. Η 5 πήραμε μεν... Α, ανάποδα είναι... Εγώ σας λέω με βάση τις στήλες με τις οποίες φορτώσαμε. Είναι ανάποδα οι ομάδες. Συγγνώμη, αλλά εγώ το βλέπω με βάση τις στήλες. Πάλι το ίδιο καταλαβαίνουμε, όμως, εντάξει. Άρα, το πρώτο το δείγμα, μάλλον το δείγμα που είναι πιο κοντά στο λάντερ, να το πω έτσι, έχει πάρει καλό PCR προϊόντο, αλλά έχει και μια αχνή ζώνη μόλις που φαίνεται από κάτω. Το βλέπετε όλοι? Το δείγμα που είναι δύο στήλες δίπλα στο λάντερ, είναι καλό μεν το PCR προϊόν, αλλά παρόλα αυτά δεν έχει πολύ PCR προϊόν. Τρία, τέσσερα δεν έχουν δουλέψει καλά και οι πέντε, έξι μακριά από το λάντερ, που είναι αντίστοιχα ένα και δύο στις στήλες, είναι καλό μεν το PCR προϊόν, αλλά έχει και λίγο PCR δευτερογενή προϊόντα. Τι θα μπορούσαμε να κάνουμε σε αυτές τις περιπτώσεις, ίσως να μειώσουμε λίγο το χλωριούχο μαγνύσιο, ή να αυξήσουμε λίγο παραπάνω τη θερμοκρασία του ανίλινγ, ώστε να εξαφανιστούν και αυτές οι δευτερογενείς ζώνες. Άρα εσείς βάζετε άνετα πέψεις οι τέσσερις από τις έξι ομάδες, οι άλλες οι δύο οι ομάδες που δεν έχουν PCR προϊόν, θα πάρουν από τους διπλανούς τους που έχουμε παραπάνω. Αυτό. Τι χρειάζεται τώρα για να κάνουμε. Πάρτε εδώ. Για καθίστε λίγο. Σε πέντε λεπτά τελειώνουμε, εντάξει, δεν έχει και τίποτα άλλο. Λοιπόν, τι έχουμε εδώ πέρα. Για ελάτε λίγο στα χαρτιά που σας έδωσα. Για κοιτάξτε όλοι τα χαρτιά, αναομάδα το χαρτί. Τι θέλει? Θέλετε όλοι από ένα πεντορφάκι. Εντάξει, πάρτε αναομάδα τα πεντορφάκια σας, για να βάλετε την πέψη. Θέλετε και έναν μαρκαδόρο. Πάρτε μαρκαδόρους. Πάρτε και από εδώ μαρκαδόρους. Είστε α1, α2, α3, α4, α5, α6. Χρειάζεται να βάλετε πιπέτες. Φέρτε και από εδώ πέρα να φέρουμε πιπέτες. Θέλετε πέντε μικρόλυτρα προϊόν της PCR αντίδρασης, δυόμιση μικρόλυτρα νερό. Βλέπετε ότι θέλουμε ένα μικρόλυτρο κατάλληλο ρυθμιστικό διάλειμμα του buffer NB3. Πώς καταλαβαίνουμε πόσο είναι ο συνολικός όγκος της αντίδρασης? 10 μικρόλυτρα. Γιατί τι κάνουμε, το ρυθμιστικό διάλειμμα που είναι 10 φορές συμπυκνωμένο, 10 επί, βάζουμε ένα μικρόλυτρο όλο και όλο. Σωστά. Εντάξει. Και βάζουμε και ένα μικρόλυτρο έντζιμο. Όλα εδώ είναι. Δηλαδή τι θέλετε, τέσσερα πράγματα θα βάλεις στο πεντορφάκι. Το DNA σας, το νερό, το ρυθμιστικό διάλειμμα και το έντζιμο. Και τελειώσατε. Έγινε? Πες μου. 15 μονάδες units είναι η δραστικότητα του ενζύμου. Είναι αναλόγω με την δραστικότητα του ενζύμου. Δεν σε ενδιαφέρει αυτή τη στιγμή. Έγινε? Να σας φέρω μόνο... Α, εδώ είναι οι πιπέτες. Λοιπόν, στάσου λίγο. 20 ή 10 θέλετε. Αυτές, νομίζω, είναι πολύ μεγάλες πιπέτες. Οι άλλες πρέπει να μου φέρετε. Τις άλλες, τις άλλες, τις άλλες. Είχε, είχε, εκεί είναι. Εκεί. Εκεί. Ωραία. Πού είναι τέσσερα. Λοιπόν, έλα από εδώ. Φέρτε λίγο και τα tips. Φέρτε και το γυάλι με το βαζάκι. Αυτή τι είναι? Από μισό 10. Τι tips παίρνει αυτή όμως? Αυτά παίρνει. Άρα χρειζόμαστε τέτοια tips και τέτοια tips. Ωραία. Ένα γυάλι με το βαζάκι. Ένα γυάλι με το βαζάκι να πετάμε τα... Λοιπόν. Έχετε εδώ. Έχετε εδώ πετάτε. Έχετε και αυτά τα tips. Αυτά τα tips δεν σου κάνουν εσένα. Ας τα αυτά. Θέλουμε αυτά. Πάρτε αυτό μακριά από εδώ πέρα. Πάρτε αυτό για να σας οργανώσω να τελειώνετε πιο γρήγορα. Είστε εδώ. Λοιπόν. Μεταφέρετε το PCR προϊόν σας και μετά βάζετε τα υπόλοιπα. Εδώ είναι. Και αφού τα βάλετε, τα κάνετε ένα βόρτεξ και μετά τα βάζετε εδώ μέσα. Εντάξει. Άρα πρώτα βάζετε το PCR προϊόν σας. Πέντε από εδώ, πέντε από εκεί. Το βάλεις? Ναι. Μετά το βάζουμε. Ποιο? Όχι, θα το χρησιμοποιήσει κάποιος άλλος το PCR προϊόν σας. Πάρτε εδώ. Σε αυτούς που δεν δούλεψε καλά το PCR. Τι θέλεις άλλο? Δυόμισι νερό. Αυτό είναι το πέντε, ναι. Πήρες εσύ για τον εαυτό σου. Κράτα το λέω, κράτα το και μετά. Πάρε νερό. Κάτω, κάτω θα το βάζετε. Κάτω, κάτω να τα αφήσετε όλα. Μετά θα το κάνετε βόρτεξ και θα στο καίει. Εντάξει. Όλα κάτω, κάτω θα τα αφήνετε. Νερό θέλετε μετά. Κι εκείνο το τύψαμε. Πάρτε σκαλά θάνατο. Δυόμισι. Βάλτε το σε μια άκρη και μετά θα το δούμε. Σημειώσετε ποια ομάδα είστε πάνω στα Επενδόρφ. Εντάξει. Τι θες, μπάφερ θες εσύ. Έλα πάρε μπάφερ. Ένα. Μπάφερ έβαλαν εδώ. Μπάφερ θα βάλετε κι εσείς. Βάλτε το καλά. Πάρε μπάφερ. Ένα μικρόλυτρο. Εντάξει. Πήρες. Το είδες. Ωραία. Και ενζυμό. Ενάμιση. Κάτω, κάτω, κάτω, κάτω, κάτω. Ωραία. Εντάξει. Και ενάμιση. Πάρε. Ενάμιση. Το κάνετε βόρτεξ και το φέρετε εδώ πέρα. Πήρες. Βάλτε κάτω, κάτω, κάτω, κάτω, κάτω πρέπει να πάει να βλέπεις. Εντάξει. Καλό σας μεσημέρι. Δεν άκουσα. Ναι. Πρέπει τώρα να μπορείτε να το κάνετε. Τώρα μπορείτε να μπείτε. Θες να το δούμε σε λίγο να τελειώσω όμως εδώ πέρα. Τελείωσες, ναι. Ναι, το μαρκαδόρο τον θέλω. Λοιπόν, βάζετε πρώτα απ' όλα PCR προϊόν μέσα στο Ependorf. 5 μικρόλυτρα. Είστε έτοιμοι κι εσείς. Πήρες. 5. Έχει 5. Δεν είναι πέντε, είναι λιγότερο. Πέντε είναι σημασμένοι, αλλά δεν ξέρω. Δώσε το λίγο ποιο ήτανε. Αυτό είναι πέντε τώρα. Εδώ έχω βάλει πέντε. Για τον άλλον τώρα θες να βάλεις και για τον Ηρακλή, ε? Ναι. Ναι. Μην μπερδέψετε τώρα. Λοιπόν, κοιτάξτε αυτό είναι της α'5 και πήρε η α'4. Και εσείς δεν σας έμεινε εσάς. Ή μήπως από την α'5 δώσετε και σε άλλους πιο πριν. Πάρτε εσύ αυτό, κάντε το α'5, θα το δώσουμε από άλλους. Που είναι το α'5 σε εσάς που περίσσεψε. Έχουμε και από άλλους να το δώσουμε. Αυτό έχουμε από εδώ πέρα. Να κάνει λίγο η πέντε και μετά εσύ Γιώργο. Έχουμε και για τους δύο. Δώστε και αυτό σε μένα. Γιώργο, ας τελειώσει λίγο αυτή η ομάδα και μετά. Όχι όλοι μαζί, εντάξει. Νερό είναι αυτό. Ποιος το πήρε το νερό από εδώ πέρα. Να βάλεις, απλώς το ψάχνει. Έβαλες εσύ το... Κάτω κάτω θα βάζετε. Δώσε το νερό. Πάρε νερό. Το τριάρι, το τριάρι. Τι δεν πήρες? Δεν πήρα. Τώρα πήρες. Χαμηλά μέσα στο βάθος θα το βάζετε. Περίμενε λίγο Γιώργο, σε παρακαλώ. Μην με μπερδεύετε. Μπάφερ θες, μπάφερ θες. Τι θέλεις. Μπάφερ θέλεις, τώρα θα το πάρεις. Θα χρειαστείς το ποτούμετρα. Όχι, καθόλου. Πήρες? Πάρε από εδώ, πάρε από αυτά. Για Patent Entry. Εντάξει, έβαλες εσύ εισήνισμο. Ωραία. Vortex και τέλειωστος. Πήρες? Πάλε εδώ. Ωραία, τώρα πήρες. Να γράψω εδώ στο πινακάκι. Α, μπράβο, ναι. Έχουμε, ναι. Πάρε από εδώ. Πόσο φτάσεις αυτό. Το οποίο, άμα το βλέπω καλά, πρέπει να είναι από την ομάδα 1 πρέπει να πήρεις. Περίμενε να σου δώσω άλλο. Εντάξει. Μη δεις, το πήρες. Μια χαρά. Πού θέλεις, τι θέλεις, πες μου. Τι ψάχνετε. Νερό. Να βάλουμε τα 5 μέρη. Ναι. Μπορείτε να πάρτε και από εδώ, έχετε? Πήρετε, από ποια ομάδα πήρετε. Μωρέα, έγινε, ok, καλώς. Έγινε, Μαρία. Πες μου, νερό θέλεις, θα σου θέρω εγώ εδώ πέρα. Έβαλες 2,5 μικρόλυτρα νερό και τώρα θέλεις ένα μικρόλυτο ρυθμιστικό, έλα. Πάρε εδώ και αυτό. Όχι, φαίνεται, φαίνεται. Πάρε, 1,5 μικρόλυτρα. Και βαθύ. Ναι, απλώς, view list. Εντάξει, έγινε, ok. Εντάξει, ένα βόρτεξ, άστε αυτό εδώ πέρα, θα το κάνω εγώ. Εντάξει, ωραία.