Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής (2) / Διάλεξη 27 / Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής - Τριανταφυλλίδης Αλέξανδρος (ΑΡΙΣΤΟΤΕΛΕΙΟ ΠΑΝΕΠΙΣΤΗΜΙΟ ΘΕΣΣΑΛΟΝΙΚΗΣ, 2014)
Εργαστήριο στα ειδικά θέματα γενετικής: Είμαστε έτοιμοι να ακούσουμε τον κύριο πρόσωπο που προσπαθεί να ξυπνήσει. Είναι άρρωστος. Είναι άρρωστος. Ε, δεν μπορείς να μιλήσεις, έπειτα γιατί δεν το λες. Θες κάποιον βοήθεια... Δεν μπορείς να το πεις, σωστό και αυτό. Ναι. Ναι, άμα δεν θες να το κάνεις και είσαι άρρωστος, μας το χρωστάς για την επόμενη βδομάδα, όπως θέλεις εσύ. Τι θέλεις. Εντάξει, την άλλη βδομάδα. Άρα, βρούμε κάποιον άλλον, ας πούμε. Α, δεν έχουμε νούμερο όμως. Δεν έχουμε τα χαρτιά εδώ πέρα. Ποιος θέλει να πει, λοιπόν, τι κάνετε την προηγούμενη βδομάδα. Αντιγόνι. Πήρνεις σε παρακαλώ, όμως, καθίστε. Δεν θέλω να είστε όλοι μαζεμένοι... Πηγαίνετε, καθίστε. Να είστε λίγο πιο άνετα. Λοιπόν, σας ακούω... Κάποιος να μου πει, τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Πίνε Λόκ, θα μας πεις τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Όχι. Άλλος. Νίκο, θα μας πεις τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Δεν σε λένε Νίκο. Ποιος είναι ο Νίκος. Εγώ είμαι, αλλά δεν νεραπάει. Είμαι ο Νίκος. Εγώ είμαι, αλλά δεν νεραπάει. Εγώ είμαι, αλλά δεν νεραπάει. Νίκος, είσαι? Νίκο, θα μας πεις τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Όχι. Καλώς. Άννα. Κάναμε από μόνο στην DNA. Ναι. Δεν θέλω τους λεπτομέρειους. Θέλω να μου πεις τι κάναμε την προηγούμενη βδομάδα. Κάναμε από μόνο στην DNA. Τι ξεκινήσαμε. Από κάποιο νηστό, προφανώς. Εντάξει. Ποιος είναι ο στόχος μας. Τι θέλουμε να κάνουμε γενικά σε αυτό το εργαστήριο. Το έχετε καταλάβει όλοι ποιος είναι ο στόχος αυτού του εργαστηρίου. Η χνηλασιμότητα. Είναι η γενική ομπρέλα. Όντως το δικό μας το εργαστήριο βασίζεται σε αυτό το πράγμα. Θέλουμε να δουλέψουμε η χνηλασιμότητα. Όμως τι χνηλασιμότητα. Να κάνουμε χνηλασιμότητα με τη βοήθεια. Αλληλούκη δεν θα κάνουμε. Είδες δεν το ξέρεις. Δεν το έχεις καταλάβει. Με τη βοήθεια γενετικών μεθόδων. Απλά. Δεν λέμε κάτι άλλο. Θέλουμε να κάνουμε η χνηλασιμότητα με τη βοήθεια γενετικών μεθόδων. Και πως θα το καταφέρουμε αυτό. Ποια είναι τα στάδια τα οποία θα πρέπει να κάνουμε. Το πρώτο στάδιο όπως είπαμε είναι η απομόνωση του DNA. Φαντάζω να σε ρωτούσα όλα αυτά σε έναν Θανάση. Λοιπόν το δεύτερο στάδιο. Ποιο είναι το στάδιο το βασικό που έχουμε να κάνουμε σήμερα. Μάγδα. Σήμερα τι στάδιο έχουμε να κάνουμε. Αυτό είναι πιο μετά. Γιάννης. Δεν είναι το βασικό στάδιο αυτό. Θα κάνουμε η ελεκτροφόρηση. Αλλά το βασικό μας στάδιο δεν είναι αυτό. Αντιγώνει. PCR. Σήμερα το βασικό μας που έχουμε να κάνουμε είναι να βάλουμε PCR. Τι PCR θα βάλουμε. Εδώ να δω ποιος έχει διαβάσει. Ποιος μπήκε στη διαδικασία να ασχοληθεί πέντε λεπτά να διαβάσει στο σπίτι. Το τι έχουμε να κάνουμε σήμερα. Τι PCR έχουμε να βάλουμε σήμερα. PCR σε ένα πυρινικό γονίδιο. Πες το. Έχουμε. Ο Διονύσιος Γιουλάτος. Που είναι πιο κάτω κάπου πρέπει να είναι. Έχει κλειδιά. Λοιπόν. Για πείτε λοιπόν. Ξέρετε τι PCR έχουμε να βάλουμε σήμερα. Έχουμε να βάλουμε ένα πυρινικό γονίδιο. Έχουμε να βάλουμε μια ιστόνι. Έχουμε να βάλουμε κάτι άλλο. Τι έχουμε να βάλουμε. Αυτό είναι για να δω να διαβάσετε. Πες Άννα. Αυτό τι PCR. Θέλω να μου πεις κάποιο γονίδιο. Τώρα δεν μου λες γονίδιο εσύ. Μου λες υποκινητές. Δεν σημαίνει τίποτα αυτό. Ποιο γονίδιο θέλω να μου πείτε. Σας τσάκωσα. Ρεφαηλία. Ποιο γονίδιο θέλω. Όχι ποιος είναι αυτό. Μπράβο. Ναι. Τιν τε λούπ. Τιν τε λούπ. Είναι η περιοχή ελέγχου του μυτοχρονδροιακού DNA. Οι οποίοι είναι περίπου χίλιες βάση. Τελικός αποτέλεσμα θα είναι αυτό. Άρα λοιπόν σήμερα. Έχουμε να βάλουμε PCR σε αυτό το γονίδιο. Γιατί αυτό το γονίδιο το συζητήσω μετά όταν έρθουν και οι υπόλοιποι. Άρα. Για να κάνουμε βέβαια το PCR πρώτα απ' όλα πρέπει να έχουμε καλό DNA. Άρα πριν κάνουμε το PCR έχει τη ώρα της ηλεκτροφόρησης. Πρώτα απ' όλα θα πρέπει να δούμε τι DNA έχουμε. Και άμα έχουμε καλό DNA να βάλουμε PCR. Άμα δεν έχουμε καλό DNA τι κάνουμε. Ξανακάνουμε απομόνωση. Έγινε. Θα βρούμε μια λύση για τα εργαστήρια. Άρα τώρα έχουμε να κάνουμε από ηλεκτροφόρηση να ετοιμάσουμε μια ηλεκτροφόρηση. Εντάξει. Δύο βασικά πράγματα. Μάλλον το βασικό που έχουμε να κάνουμε σήμερα είναι το PCR. Πριν από αυτό χρειάζεται να κάνουμε και μια ηλεκτροφόρηση. Και εδώ έχετε πάλι η δικιά σας σειρά. Τώρα θα ετοιμάσετε εσείς τζελ ηλεκτροφόρησης. Ωραία και χθες το βράδυ τα πίνω μέχρι εργάτη μου βάζει να κάνω. Με προκαλήσω όμως τώρα να πω ότι εσύ θα είσαι αυτός ο οποίος θα το κάνει το τζελ. Σήμερα θα επιλέξω... Ποιον θα επιλέξω να κάνει το τζελ. Θες να κάνεις το τζελ. Ωραία. Δουλεύουμε όπως σας είπα θυμίσαμε το μικρό σου. Αθηνά. Δουλεύουμε σαν ομάδα. Που σημαίνει ότι εσείς βοηθάτε την Αθηνά να κάνει το τζελ. Που σημαίνει ότι δικιά μου η συμβολία εδώ πέρα είναι κυρίως μόνο να μην πιάσετε φωτιά. Τα υπόλοιπα τα κάνετε εσείς και εγώ είμαι από δίπλα να προσέχω. Έγινε. Τι χρειάζεται για να κάνουμε μια ηλεκτροφόρηση, να προετοιμάσουμε μια ηλεκτροφόρηση εργαρώζεις. Τα λέει όλα το φυλάδιο που σας έχω δώσει εκεί πέρα. Στη λογική ότι εσείς έχετε έναν ομάδα, στη λογική ότι εσείς διαβάζετε και προετοιμάζεστε και καταλαβαίνετε τι κάνετε και δεν ακολουθείτε ένα πρωτόκολλο απλώς, δεν χρειάζεται να σας πω τίποτα. Γιατί εσείς πια τα ξέρετε. Γιατί εσείς τα έχετε ψάξει. Γιατί εσείς έχετε συνηθίσει από τα εργαστήρια να είστε προετοιμασμένοι. Και άλλα τέτοια ουτοπικά πράγματα. Εντάξει. Λοιπόν, για να κάνουμε την ηλεκτροφόρηση εργαρώζεις. Τα έχουμε όλα εδώ πέρα. Η Αθηνά θα έρθει να κάνει την ηλεκτροφόρηση. Θα μαζευτούμε όλοι προς τα εδώ, αφήνοντας και λίγο χώρο στην κάμερα. Εντάξει. Και μπορούμε να ξεκινήσουμε. Μαζευόμαστε εδώ πέρα για να ετοιμάσουμε την ηλεκτροφόρηση της εργαρώζης. Λέτε στην Αθηνά. Λέει η Αθηνά τι θα κάνει ένα πάσα στιγμή. Και εσείς συμφωνείτε μαζί της, διαφωνείτε της. Λέτε η Αθηνά μπορεί να ζητήσει βοήθεια από σας γιατί δεν ξέρει κάτι να το κάνει. Και λέει ρε παιδιά, εγώ δεν ξέρω τώρα τι θα κάνω. Βοηθήστε κι εσείς να μου πείτε την άποψή σας. Εντάξει. Και επίσης συζητάτε μαζί σας, μεταξύ σας, γιατί το κάνουμε το κάθε τι που κάνουμε. Κι εγώ εδώ είμαι. Αλλά παρόλα αυτό το σημαντικό είναι να ξέρετε τι κάνουμε ένα πάσα στιγμή. Όχι απλώς βάζω δύο από αυτό και λίγο αλάτι και λίγο από το άλλο και εντάξει είμαστε. Έγινε? Ξεκινάμε. Δεν θέλουμε να ενισχύσουμε το DNA που μας ενδιαφέρει. Ναι, αυτό το PCR είναι. Αυτό είναι το βασικό στάδιο που θέλουμε να κάνουμε. Ναι, βεβαίως. Το TBI τι είναι? Τι είναι το TBI? Ξέρετε, δεν ξέρετε. Έχετε κάνει ηλεκτροφόροι σεγαρόζες, άμα δεν κάνω λάθος. Και όχι μόνο μια. Άρα λοιπόν, υποτίθεται ότι όλα αυτά που θα δούμε τώρα, έπρεπε να τα ξέρετε ήδη. Σωστά. Γιατί δεν είδατε μέσα σε αυτά που συζητήσατε, δεν είχε πουθενά εργαστηριακό για να λέει τι έχει μέσα και τα λοιπά. Θα ρωτήσω την κυρία Κουβάτση. Αυτό ήταν εκτός ύλης. Όταν το είδατε και είναι το διάλειμμα εκεί μέσα, μέσα του οποίου ήταν το τζέλ. Τι είπατε, νεράκι, ότι είναι αυτό, νομίζετε ότι είναι νεράκι? Ρωτήσατε ποτέ? Τι είναι αυτό? Όλα έτοιμα είναι. Να σε δώ, τότε θα κάνεις εσύ διπλωματική και θα χρειάζεται να ετοιμάσεις τζέλ, να δεις πόσο έτοιμο θα είναι όλα αυτά τα πράγματα. Έγινε. Το TBI τι είναι? Το TBI είναι ένα διάλειμμα το οποίο είναι τρεις, BORIC και DTA. Το οποίο έχει βασικά τρεις, BORIC και DTA. Που έχει τα απαραίτητα συστατικά, τα απαραίτητα ιόντα βασικά, ώστε μέσα στη συσκευή της ηλεκτροφόρησης να υπάρχει ένα κύκλωμα μέσα από το οποίο λόγω του διόδου του ηλεκτρικού ρεύματος να μετακινείται και το DNA μας. Άμα ήτανε σκέτο το νερό απεσταγμένο χωρίς καθόλου ιόντα, τότε θα μπορούσε να κλείσει το κύκλωμα για να μπορούμε να έχουμε ηλεκτροφόρηση του DNA. Εντάξει. Άλλη ερώτηση. Αυτά για αρχή. Λοιπόν, Αθηνά, θέλω να λες με λίγο δυνατή φωνή, όσο μπορείς, για να παραλαμβάνω και εγώ, άμα χρειάζεται να σε ακούνε και όλοι εδώ πέρα, να ξέρετε όλοι μαζί τι κάνετε. Αρχίζουμε να παρασκευάζουμε το διάλειμμα TBE. TBE, ναι. Άρα χρειάζομαι προς 4 ml TBE. Λοιπόν, τώρα λίγο να δούμε. Λέει εδώ πέρα. Λέει, για τον έλεγχο του DNA παρασκευάζεται πικτή αγαρόζης 1% προσθένοντας σε μια κονοκύφυάλη, 120 ml διαλείμματος TBE1x, 24 ml TBE5x, 96 ml νερό και 1,2 γραμμάρια αγαρόζη. Εδώ εγώ έχω δύο ερωτήσεις να κάνω. Εσείς προφανώς τα ξέρετε, εφού δεν ρωτάτε τίποτα. Μήπως θέλετε να κάνετε καμιά ερώτηση. Εδώ το παίζω άσχετος και ρωτάω εσάς. Τι σημαίνει αυτό το 1x, 5x κλπ που λέει εκεί μέσα. Ξεφυσάει ο Γιώργος δίπλα μου. Ξέρεις, πες. Η συγκέντρωση, δεν είναι. Τι σημαίνει συγκέντρωση, δεν είναι ακριβώς η συγκέντρωση, αλλά είναι κάτι σχετικό με συγκέντρωση. Θα κάνουμε στην ουσία αρέωση, θα βάλουμε νερό. Είναι 1 προς 4, αλλά θα το κάνουμε 1π, εννοείταν 5π. Το 1 προς 4 με μπερρέψες. Βάζουμε 4 φορές την ποσότητα του 5x για να το κάνουμε 1x. Πες το πιο απλά. Ότι είναι 5 φορές συμπυκνωμένο, άρα θέλει αρέωση 1 προς 5. Άρα θέλει ένα μέρος από αυτό το υλικό και τα υπόλοιπα 4, 1 συν 4, 5. Θέλουμε και να κάνουμε αρέωση, εντάξει. Θα το δείτε πολλές φορές αυτό το x. Και πάντα δείχνει το πόσες φορές συμπυκνωμένο είναι. Θα το δούμε και λίγο αργότερα σήμερα αυτό το x. Και πάντα θα σημαίνει ότι τι θέλω εφόσον είναι 120 ml το διάλειμμα TBE, και είναι 5 φορές συμπυκνωμένο το δικό μου το διάλειμμα, πρέπει να κάνω 120 x 5 να βάλω 24 ml νερό και το υπόλοιπο να το κάνω σε 24 ml TBE και το υπόλοιπο να είναι νερό. Έγινε? Άλλη ερώτηση, γιατί 1% αγαρώζει? Τι να ξέρω κι εγώ. Εσείς ξέρετε που κάνετε και άλλες φορές ηλεκτροφορίες της αγαρώζης. Έχετε δει ότι όσο μικρότερη η συγκέντρωση της αγαρώζης, τόσο μεγαλύτερη θα είναι η πόρη. Όσο μικρότερη η συγκέντρωση, τόσο μεγαλύτερη η πόρη. Συμφωνούμε? Συμφωνούμε, ναι, συμφωνούμε. Κι από εκεί εσείς συμφωνείς. Εσείς τι κάνετε, το καταλαβαίνετε, το θυμάστε αυτό το πράγμα? Κάπως. Και γιατί θέλουμε να κάνουμε 1%, δηλαδή που μπορεί να κάναμε κάτι άλλο. Όταν θα έρθει η ώρα να κάνουμε ηλεκτροφόρηση το PCR προϊόν στο επόμενο εργαστήριο, τι τζελ θα κάνουμε εκεί πέρα, με περισσότερη ή μικρότερη αγαρώζη ή με λιγότερη αγαρώζη? Περισσότερη. Περισσότερη. Θα το κάνουμε πιο συμπυκνωμένο, θα το κάνουμε πιο πυκνό, εντάξει. Άρα τώρα τι DNA έχουμε, τι DNA, αυτό είναι πολύ σημαντικό που σας ρωτάω. Συνεχώς θα ρωτήσεις εκεί πέρα. Τι DNA έχουμε αυτή τη στιγμή, τι ελέγχουμε αυτή τη στιγμή, ε? Ολόκληρο το DNA, ολόκληρο το γωνιδιωματικό DNA. Προσέξτε, γιατί μπερδεύεστε, γιατί επειδή θα κάνουμε PCR στο μητοχοδριακό DNA, κάποιες φορές νομίζετε ότι κάναμε απομόνωση μητοχοδριακό DNA. Δεν κάναμε απομόνωση μητοχοδριακό DNA, κάναμε απομόνωση συνολικού DNA. Συνολικό περιλαμβάνει και πυρνικό και μητοχοδριακό DNA, εντάξει. Άρα, εσείς έχετε το συνολικό σας DNA και αυτό θέλετε να αναπτροφορήσετε τώρα. Και επειδή είναι μεγαλομωριακό, θα κάνουμε μια αγαρόζη με λίγη αγαρόζη, γιατί 1% εντάξει. Ωφ, τέλει το πρώτο στάδιο! Πάμε! Ε, να σε παίρνει η κάμερα. Ωπα, έβγήκε. Μάλλον δεν είχε κλείσει καλά. Ναι, ναι, ναι. Δεν έχεις θέμα, εντάξει, καλά είσαι. Ωραία. Πες το, ναι. Το παραπάνω. Το παραπάνω. Υποθετικά, πρέπει να το ρίξεις στον υπτήρα. Να μην το ξερήξεις πίσω. Ρίξε το, ναι. Πόσο έχεις εσύ εκεί πέρα? Ε, ρίξτε λίγο. Δεν είναι σωστό να είναι 28, ναι, είναι 24 ml. Θυμίστε μου μετά, όταν δεν μας παίρνει η κάμερα, να σας πω και την εμπειρία μου από το Σαββατοκύριακο το προηγούμενο, που πήγα σε σεμινάρια για πιστοποίηση εργαστηρίων για εργαστηριακές αναλύσεις. Εκεί να δείτε το πόσο πρέπει να προσέχεις τα πάντα. Πρώτη φορά τα είδα όλα. Πρώτη φορά κατάλαβα τι σημαίνει αναλυτική χημεία, όπου πραγματικά αναλύεις τα πάντα στο εργαστήριο μέσα σε λεπτομέρεια. Λοιπόν, 24 ml. Παίρνεις εκείνη την κονική φυάλλη. Και τι άλλο χρειάζεσαι? Όχι, γιατί δεν πειράζει. Γιατί εκεί θα πάει και αυτό. Θέλει λεπτομέρεια. Θέλει λεπτομέρεια. Θα ανακατευτεί η λεώνη συντόμως, οπότε μην ενισχύσουμε το ανακάτεμα. Επόμενο στάδιο, τι άλλο θέλουμε να κάνουμε? Ωραία. Αν θέλεις, αν και δεν έχω κουταλάκι, ο πιο απλός τρόπος για να το κάνεις είναι να βάλεις αυτό σιγά σιγά. Πόση ποσότητα? Γιατί 1,2? 120 ml, το 1% είναι 1,2 γραμμάρια. Θα βάλεις, θα βάλεις, έχει μπόλικο πράγμα να βάλεις. 1 γραμμάρι είναι μπόλικο. Εντάξει, καλά είσαι. Κάνε το σαν χωνή κάτι, έτσι, ναι, και το ρίχνεις. Λοιπόν, τώρα βάλε γάντια. Πρώτα και εκείνα τα γάντια, μετά και τα γάντια τα άλλα. Και τα ένα και το μεν και το δε. Γιατί γελάς, Ιρακλή. Σε δω και εσένα όταν κάνεις ελεκτροφόρηση. Θέλουμε αυτό εδώ. Παίρνουμε αυτό από εδώ πέρα. Βάλει και το άλλο το γάντι. Λοιπόν, αναπτύρα. Τώρα, θέλω κανονικά, κατέβασε και αυτά. Εντάξει, λοιπόν. Κάποιος να τις ανάψει μάλλον το καζάκι, έλα. Τώρα, για την ελεκτροφόρηση. Πρώτη φορά νομίζω ετοιμάζεται το βράζετε. Δεν έχετε δει ποτέ να βράζει, εντάξει. Μην το φοβάσαι, το έχεις από πάνω. Η αγαρόζη έχει μια καλή ιδιότητα. Ότι, ας πούμε, υπήρχαν παλιά και τα τζέλ αμίλου. Για την ελεκτροφόρηση πρωτεϊνώνωση από το πλύστον. Εκείνοι θέλουν πάρα πολύ προσοχή, όσον αφορά το πώς το ετοιμάζεις. Και ήθελαν και πάρα πολύ ανακίνηση καλή. Και αυτή θέλει ανακίνηση. Αλλά εντάξει, δεν υπάρχει τόσο μεγάλο ανάγκη να το κάνεις συνέχεια. Απλώς θέλει να το κουνάς πού και πού, έτσι. Και μέχρι πότε το βράζουμε. Μέχρι να γίνει διαβιές. Το μόνο φόβο που λίγο έχουμε, είναι άμα το αφήσεις πάρα πολύ ώρα να βράσει, και αρχίσεις να βράζει καλά, μπορεί να ξεχειλίσει. Οπότε, δε θα το αφήσεις επαόριστο, γιατί μετά αρχίσεις να πέφτει έτσι η αγαρόζη. Απλώς το προσέχεις, το κατάλαβες, θα φανεί πολύ ξεκάθαρα πότε αρχίσεις να βράζει. Γιατί θα φανούν οι φυσαλίδες, δηλαδή. Θα φουσκώνει μόνο του, ευχαριστώ. Ήδη με το που θα αρχίσει να ζεσταίνεται από κάτω κάτω, θα αρχίσει να φαίνονται οι φυσαλίδες κάτω κάτω. Κούνε το, κούνε το λίγο. Σαν να ετοιμάζετε ζελέι, να δεν είναι τίποτα άλλο. Και σκεφτείτε ότι τα τζέλη του αμύλου που κάναμε, δεν κάναμε 100 ml, μπορεί να χρειαζόταν να ετοιμάσουμε 400 ml, οπότε ήταν και πιο βαρύ να το κουνάς συνέχεια, αυτό θα κουραστείς λίγο, αλλά τα τζέλη του αμύλου να τα έχεις συνεχώς πάνω από τη φωτιά, να κάνεις αυτό, να δεις εκεί κούραση. Και αυτά πια επίσης δεν απαραίτητο να τα κάνεις μέσα σε γκαζάκι, μπορούμε ανύπτυα να τα βάλουμε και σε φούρνο μικροκυμάτων, ενώ τα τζέλη του αμύλου δεν μπορείς να τα βάλεις σε φούρνο μικροκυμάτων. Θέλει λίγο ακόμα όμως, πρέπει να αρχίσεις να είναι ομοιόμορφος στις φυσαλίδες. Να κίνησέ το, να κίνησέ το λίγο, λίγο, λίγο ακόμα και άλλο, και άλλο, και άλλο, και άλλο. Τώρα μην το σταματάς για να γίνει ομοιόμορφο. Δεν, θέλει λίγο ακόμα. Και ξέρω την κατάλληλη στιγμή που μπορεί να φύγει, ώστε να μην έχουμε φόβο για οτιδήποτε. Άμα κουραστείς, μπορείς να τα αφήσεις και κάτω λίγο. Για σταμάτα λίγο να δούμε τώρα τι γίνεται. Ναι, σήκωσε από τη φωτιά, εντάξει, τώρα καλά είμαστε. Λοιπόν, ωραία, κάντε μια τελευταία φορά. Φαίνεται ότι μια χαρά έχει γίνει διαβιές, το βλέπετε ότι είναι διαβιές. Το βάζεις κάτω, λίγο να αρχίσει να κρυώνει, βάλτε το εκεί καλύτερα στο χαρτί. Και πριν κάνουμε οτιδήποτε άλλο, θέλω να πάμε στο στάδιο 5, για να ετοιμάσουμε λίγο την υποδοχή για το τζέλ. Όπου θέλω, λίγο περίμενε, για να το κάνουμε και να φαίνεται κιόλας. Πάρε τα αυτά, βάλτε από εκεί. Αυτό δεν μας χρειάζεται. Τώρα, πάρε αυτά. Κοιτάξτε να βάλω κι εγώ, άμα είναι γάντι. Από εδώ και πέρα, και πιο που χρειαζόταν, αλλά τώρα ακόμα περισσότερο, φοράμε γάντια, γιατί όλα αυτά, τα χρησιμοποιούμε γενικά για την ελεκτροφόρηση. Και την ελεκτροφόρηση, όπως θα βάλουμε τώρα σε λίγο στο στάδιο 4, την κάνουμε με βρωμιούχο εθίδιο. Το βρωμιούχο εθίδιο, ξέρετε, το πιο παλαιό, γιατί σκέφτομαι, είναι καρκινογόνο. Οπότε, επειδή γενικά όλα αυτά εμβαπτίζονται σε διαλύματα, που έχουν μέσα σε βρωμιούχο εθίδιο, καλό είναι να μην το πιάνουμε γυμναχέρια. Έγινε. Αυτά είναι οι χτένες μας. Αυτό είναι το τρέι της ελεκτροφόρησης. Για να μπορέσει να ετοιμαστεί, χρειάζεται να το κλείσουμε από εδώ και από εδώ, με πλαστική ταινία, ώστε να είναι έτοιμο. Μετά, όταν θα ρίξουμε την αγαρόζη, να μην ξεχειλήσει. Θέλει λίγο προσοχή απλώς όταν θα βάλουμε τις ταινίες, ώστε να κλείσουν καλά εδώ πέρα στις γωνίες, και να μην μας ξεχειλήσει μετά. Και από τη στιγμή που θα βάλουμε την ταινία, την πλαστική, αριστερά και δεξιά, μετά θα βάλουμε και τις χτένες μας στις κατάλληλες θέσεις, για να δημιουργήσουμε τα πηγαδάκια μέσα στο οποίο θα κάνουμε την ελεκτροφόρησή μας. Αυτό το έχετε δει. Άρα, έχουμε και νυχτέρι. Ωραία, είναι χαρά. Άρα, παίρνεις ταινία. Ναι, τώρα θα παιδευτείς λίγο με τα γάντια. Θέλει νύχια. Εντάξει, το έκανες. Πιάνεις εσύ από πάνω. Και θέλεις και κάποιον να την κόψει και όλα στην ταινία μετά. Άρα, θέλει να πιάσει από εδώ περίπου, αλλά επειδή είναι και παχιά ταινία να έχει και χώρο για να πιάσει από κάτω και να κλείσει καλά. Ωραία, μια χαρά είσαι. Άψωγα, μια χαρά είσαι. Εντάξει, καλά είναι η θέμα. Ωραία, κλείνεις. Παγγελματίας. Άψωγη. Και την άλλη, ναι. Βοήθα λίγο, Ραφέλη, γιατί εκεί πέρα έχει κοπεί λίγο παράξενα να το φτιάξεις, να το κάνεις ένα κομμάτι. Εντάξει. Να ρωτήσω κάτι. Ό,τι θες. Γιατί να μην υπάρχουν δοχεία που να είναι ήδη... Άμα είναι κλειστά, έχεις αρχίσει αυτά τα δοχεία, τότε μετά δεν γίνεται πώς θα βγει... Όχι πώς θα βγαγαρώζει. Θα είναι κλειστό το δοχείο, πότε μετά το DNA όταν θα διαχωρίζει θα μπορεί να περάσει απ' έξω. Λέει πρέπει να είναι ανοιχτή αυτά από τη μια και την άλλη πλευρά. Πρέπει να είναι ανοιχτά. Αυτό που υπάρχουν σε κάποια δοχεία, ηλεκτροφόρηση, είναι πέρα από τις θέσεις για τις χτένες. Υπάρχουν και άλλες θέσεις στην άκρη αριστερά και δεξιά και υπάρχουν τέτοια όρια που το βάζεις... και κλείνει ερμητικά και από εδώ και από εκεί. Το οποίο όμως δεν θέλει και να έχει ένα λαστιχά εκεί για να μπορέσει να κλείσει καλά. Το θέμα είναι ότι παλιά είχαμε τέτοια αλλά είναι λίγο άβολα γιατί κάποιες στιγμές τα λαστιχά και χαλάνε... μετά δεν κλείνουνε καλά, οπότε τελικά πάλι το ίδιο κάνεις. Μια άλλη διαδικασία που μπορείς να κάνεις, κι ας αυτό γίνεται, είναι ότι μπορείς κάποιες φορές να ετοιμάσεις το τζελ... το τζελ θα το τρέξουμε έτσι. Εντάξει, δείτε λίγο όλοι. Το βάλουμε έτσι. Δεν θυμάμαι ακόμα και σε αυτή, όταν θες να ετοιμάσεις το τζελ μπορείς να το ετοιμάσεις πριν το τρέξεις σε αυτή την κατάσταση... οπότε κλείνει από εδώ και από εκεί. Αλλά κι αυτό είναι λίγο πέδεμα και αυτό μπορεί να γίνει. Εμάς μας βολεύει να το κάνουμε έτσι. Κάποιοι άλλοι μπορεί να το δείτε και κάπου αλλού, κάπως διαφορετικά να γίνεται. Εντάξει, όπως επίσης και αυτό που μπορώ να πω είναι ότι εμείς θα βάλουμε το βρωμιούχο εθίδιο τώρα... το οποίο κάνει την διαδικασία λίγο πιο βρώμικη. Σε κάποιο άλλο εργαστήριο που μπορεί να δουλέψετε εσείς... γίνεται μια άλλη διαδικασία. Ετοιμάζεις τρέξει το τζελ χωρίς βρωμιούχο εθίδιο και κάποια στιγμή το σταματάς... και το βάζεις σε ένα δοχείο που έχει αποκλειστικά εκεί πέρα μόνο βρωμιούχο εθίδιο. Άρα, λοιπόν, τη χρώση του DNA... την κάνεις στο τέλος. Ποιο είναι το μειονέκτημα αυτής της κατάστασης όμως, άμα θες να το κάνεις έτσι. Για σκεφτείτε, ας το πάμε διαφορετικά. Όχι, και αυτό δεν υπάρχει θέμα να μας παγώσει. Γιατί το βάζεις με το βρωμιούχο εθίδιο? Τι ιδιότητα έχει το βρωμιούχο εθίδιο, να το ξεκινήσουμε πιο απλά. Στη δίκλωνη έλικα του DNA προσδένεται και έχει την ικανότητα να φωσφορίζει. Άρα λοιπόν, γιατί το χρησιμοποιούμε με το βρωμιούχο εθίδιο? Για να παρακολουθούμε το DNA, πού βρίσκεται και τι κάνει. Άρα ποιο είναι το μειονέκτημα όταν θέλουμε να χρωματίσουμε κάποια στιγμή στο τέλος την ηλεκτροφόρηση. Και όχι εξ αρχής να μπορούμε να το χρωματίσουμε. Το πλεονέκτημα σίγουρα είναι ότι είμαστε πιο καθαροί. Γιατί δεν έχουμε βρωμιούχο εθίδιο και δουλεύουμε συνέχεια. Ενώ η άλλη περίπτωση είναι ότι τελειώνει η ηλεκτροφόρηση, πας σε ένα άλλο δοχείο που έχει μέσα ένα διάλειμμα TB με βρωμιούχο εθίδιο και το αφήνεις εκεί πέρα να το βάψεις το DNA και να το δεις. Ποιο είναι το μειονέκτημα όμως αυτό? Δεν μπορούμε να παρακολουθήσουμε την πόλη που έρχεται. Δηλαδή, άμα θέλεις να βλέπεις αναπάσαστα στιγμή, τώρα βρισκόμαστε εδώ πέρα. Τώρα θέλει λίγο ακόμα να τρέξει το DNA. Δεν τελειώσαμε, θέλω να τρέξει και άλλο το DNA, δεν μπορείς να το παρακολουθείς αυτό το πράγμα. Αυτό είναι, οπότε εμείς προτιμάμε πάντα να το κάνουμε έτσι γιατί μπορούμε να το τρέξουμε λίγο να δούμε πήραμε το αποτέλεσμά μας που θέλαμε. Όχι, ξαναβάλτε το να τρέξει και άλλο. Το πήραμε, ok, τελειώσαμε. Έγινε. Λοιπόν, έτοιμο και αυτό, βάλει και τσιχτένες. Γιατί έχουν διαφορετικό χρωματάκι τυχαία για να θέλουν να είναι όμορφα? Είναι διαφορετικό πάθος. Άμα τις δείτε και όλες αυτές είναι λίγο πιο παχιά σε σχέση με αυτήν. Τώρα, λεπτομέρειες, χιλιοστά και τα λοιπά δεν θυμάμαι. Και τι σημαίνει ότι έχουν διαφορετικό πάθος, που μας ενδιαφέρει αυτό εμάς? Θα χρησιμοποιήσουμε διαφορετική χτένα ανάλογα με το μέγεθος του DNA που θέλουμε να τρέξουμε. Διαφορετική ποσότητα. Είναι θέμα ποσότητας που θέλουμε να ελεκτροφορήσουμε μετά. Βάλει και τη μία και την άλλη δεν έχει σημασία. Περίμενε λίγο κανονικά, εδώ είναι το πάνω μέρος. Βάλει εδώ τη μία. Βάλει την άλλη εδώ. Και γύρνα το και έτσι. Γιατί υποθετικά το DNA θα το βάλουμε και θα τρέξει προς εδώ πέρα. Εντάξει, αυτή είναι η κορυφή και αυτή είναι η άλλη κορυφή. Τώρα, μια που τα λέμε αυτά τα πράγματα, ας τα πούμε μετά. Λοιπόν, είμαστε έτοιμοι λίγο να δούμε τι γίνεται και με το βρωμιούχο αιθήδιο. Αυτό ακόμα καίει. Και πώς το ξέρετε ότι καίει, γιατί άμα το κάνω έτσι, καίγομαι. Άρα, πολύ καλός τρόπος. Πάρε λίγο, ναι, το 50 βαθμός να βάζουμε θερμόμετρο και τα λοιπά. Δεν έχουμε άλλα κι άλλα πράγματα, ξέχασα το θερμόμετρο. Βάρε, ξαναβάλε λίγο το γάντι. Πιάσ' το, πάσ' στην βρύση και με προσοχή, ώστε να μην μπαίσει νερό μέσα στο μπουκαλάκι, να τρέχει γύρω γύρω στα τυχόματα. Απλώς, για να είναι ομοιόμορφο, θέλει να το κουνάς και λίγο. Θα σου το ανοίξω εγώ τη βρύση. Τρέχει, έχει πρόβλημα μήπως η βρύση, περίμενε. Στη βρύση αυτή δεν τρέχει. Από εδώ δεν τρέχει, στάζει μόνο. Από εδώ δεν τρέχει, ξεκίνηται η βρύση. Τι διαφορά βάλουμε τις χτένες από τώρα ή αφού βάλουμε τις χτένες. Πότε θα βάλουμε τις χτένες, πότε μετά. Αφού ρίξεις την υγρή αγαρόζη, δεν έχει διαφορά, όχι. Αλλά καλύτερα κάνε το τώρα να υπάρχουν εκεί πέρα οι χτένες, να μην το ψάχνεις μετά. Ναι είναι έτοιμο, ναι Άννα. Τι σημασία πόσο σώτα δεν είχε βάλει. Άννα, δεν είχε βάλει. Ναι είναι έτοιμο, ναι Άννα. Ναι, κάποιες φορές θέλεις να ελεκτροφορήσεις λίγο DNA, κάποιες φορές θέλεις να ελεκτροφορήσεις πολύ DNA. Εξαστάται με τι θες να κάνεις. Εμείς αυτό που θέλουμε να δούμε είναι να ελέγξουμε αν μας δούλεψε το πιστό ή από μόνος. Δεν έχει σημασία τι θα φορτώσουμε. Κάποιες φορές όμως μπορείς να ετοιμάσεις PCR, πενιντάρα αντίδραση και να πρέπει να ελεκτροφορήσεις και τα πενήντα μικρόλυτρα. Γιατί? Γιατί μπορεί μετά αυτό το PCR προϊόν σου να θέλεις να κόψεις τη συγκεκριμένη ζώνη και να κάνεις άλλα πράγματα μετά. Οπότε εκεί πέρα θες να έχεις παχές χτένες, ώστε να μπορεί να χωρέσει πολύ μεγάλη ποσότητα DNA. Απαντάω σε αυτό που ρώτησες. Τα ίδια θα είναι, απλώς πού φαίνεται πιο καλή η ελεκτροφόρηση. Προφανώς στις λεπτές τις χτένες, γιατί εκεί πέρα γίνονται πιο sharp οι ζώνες. Αλλά άλλο, όταν θέλεις να ελέγξεις διαφορετικά δείγματα DNA, τα οποία είναι και κοντά σε μεγέθη, αλλά θες να δεις αν είναι διαφορετικά, με βάλεις πάρα πολύ ποσότητα, ζώνες οι οποίες είναι σχεδόν παρόμοιο μεγέθους, που θα έχεις πάρα πολύ DNA, δεν θα μπορείς να καταλάβεις τι έχεις εκεί πέρα, άμα είναι πραγματικά διαφορετικού μεγέθους. Οπότε θα θέλεις σε τέτοις περιπτώσεις, άμα θες να δεις μόνο τη διαφορά μεγέθους, θα πρέπει να έχεις λεπτές ζώνες. Το DNA πρέπει να είναι πιο κάτω, ναι. Άρα λοιπόν θα θέλεις να έχεις λεπτές ζώνες, λίγη ποσότητα DNA να φωνούν διαφορές. Άμα θες μετά, όμως, να πεις ότι πρέπει να το κάνεις κάτι, πρέπει να το τελεκτροφορήσεις όλο, τότε εκεί πέρα χρειάζεσαι παχαίες ζώνες, παχαίες πηγαδάκια. Και μάλιστα, σε κάποιες περιπτώσεις, μπορείς να πάρεις ταινία και να ενώσεις πηγαδάκια μαζί. Δύο, τέσσερα, πέντε, για να μπορέσεις να φωντώσεις ακόμα περισσότερο DNA. Συμβαίνει και αυτό. Έγινε. Αθηνά, ελέγχεις άμα είναι καλή η θερμοκρασία με το χέρι. Να μπορείς να το αντέξεις από κάτω στη βάση. Αν μπορεί να αντέξει το χέρι σου στη βάση, τότε είσαι καλά. Άμα δεν μπορεί να το αντέξει, τότε σημαίνει ότι θέλει λίγο ακόμα κρύωμα. Το καλό της αγαρός ποιο είναι. Ότι ακόμα και αν, κατά λάθος, το παγώσουμε πάρα πολύ και πήξει το τζέλ, μπορείς να το ξαναβράσεις και να ξαναγίνει υγρό και να τα ξαναπήξει. Ενώ στο άμυλο είναι τέτοια η φύση του αμύλου, που άμα πήξει δεν γίνεται τίποτα άλλο. Εντάξει, εντάξει, Αθηνά, καλά θα είναι. Ωραία, λοιπόν, τελείωσες με αυτό, θέλουμε να βάλουμε τώρα βρωμιού χοηθίδιο. Πόση ποσότητα βρωμιού χοηθίδιο θέλουμε να βάλουμε? Πέτα. Ωραία, τι βάζεις το 4. Προφανώς γιατί έχει τέσσερα μικρόλυτρα, πες μας, αφού ρωτάς. Θα μπορούσε να είναι και 8 μικρόλυτρα, θα μπορούσε να είναι και 25 μικρόλυτρα, από τι εξαρτάται πάντα, ποιος είναι ο στόχος μας. Το βρωμιού χοηθίδιο είναι αυτό εδώ πέρα. Το ανοίξουμε προσοχή, προς την κάμερα. Ανάλογα με το τι συγκέντρωση θέλεις να έχεις το βρωμιού χοηθίδιο στο τελικό σου το διάλειμμα. Και το τι συγκέντρωση είναι το αρχικό το στόξου. Άμα έχεις πυκνό βρωμιού χοηθίδιο, χρειάζεται να βάλεις λιγότερο βρωμιού χοηθίδιο. Ανάλογα την ποσότητα διαλύματος έχεις. Εδώ τώρα κάνουμε ένα τζέλ, το οποίο είναι 120 ml. Μπορεί να χρειαζόταν να κάνουμε τζέλ ένα λίτρο, που λέει ο λόγος. Άλλη ποσότητα θα βάλεις εκεί πέρα. Γιατί είναι φωτοευαίσθητο το βρωμιού χοηθίδιο. Ωραία, κόκκινο, κόκκινο. Εκεί μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα, μέσα. Ε, ναι. Εντάξει, OK. Λοιπόν, πετάς το τυπάκι από εδώ πέρα, εδώ. Ξεχωριστά, το κλείνεις αυτό με προσοχή. Το βάζεις πίσω. Ανακατώνεις, για να πάει να γίνει ομοιόμορφο. Ωραία. Λίγο ακόμα, λίγο ακόμα, λίγο ακόμα. Και τώρα... Ναι, τελειώσαμε. Προσέξτε λίγο πόσο αραιό είναι τώρα, για να θυμάσουν να κάνουμε τον τζέλο το 2% πόσο πιο πυκνό όρθιο θα είναι την ώρα που θα τρέχει. Τώρα είναι το 1%, είναι πιο υγρό. Ωραία. Υποθετικά έχει δυο-τρεις φυσαλίδες. Τα φυσαλίδες έτσι καλύτερα πάντα είναι στην επιφάνεια. Υποθετικά θέλει να τις σπάσουμε, αλλά και άμα δεν σπάσουν δεν έγινε και τίποτα. Γιατί έτσι και δεν είναι επιφάνεια. Δεν πρόκειται να μας επηρεάσουν το DNA. Το DNA τρέχει από μέσα. Ωραία, έσπασε. Αυτό. Ευχαριστούμε την Αθηνά. Μπράβο. Αψίλου. Και τώρα. Να κάνουμε 5 λεπτά διάλειμμα να δούμε κι άλλοι τι κάνουν. Γιατί τώρα θα θέλουμε να πούμε 5 πράγματα για το PCR. Τα ξέρετε θα τα πούμε σε μια λίγο πιο λεπτομερή διαδικασία. Και σήμερα λοιπόν ποιο είναι το βασικό μας στάδιο. Τι είναι το βασικό που έχουμε να κάνουμε. Πάλι με δύο απαντάει. PCR. Την ηλεκτροφόρηση που θα κάνετε δεν είναι βασικό στάδιο. Είναι ένας έλεγχος. Άμα έχετε απομονώσει καλό γονιδιωματικό DNA στο προηγούμενο εργαστήριο, το οποίο θα χρησιμοποιήσετε για να βάλετε PCR. Αλλά το βασικό μας σήμερα είναι το PCR. Άρα, ξεκινάμε. 5 πράγματα να πούμε για την PCR. Την PCR την ξέρετε. Έχετε κάνει PCR. Δεν κάνετε σε εργαστήριο γενετικής ανθρώπου. Τι είναι η PCR. Νομίζω ότι με PCR σχολιάζετε και στο σχολείο. Λέτε 5 πράγματα και στην τρίτη ηλικία ή στη δεύτερη ηλικία. Τι είναι η PCR. Ποιος θέλει να πει. Πες, Μάγνα. Ναι, αλλά όταν λέμε είναι ενίσχυση του γενετικού υλικού. Γενικά του γενετικού υλικού είναι... Άρα, συνήθως όταν μιλάμε για PCR μιλάμε για στοχευμένη ενίσχυση μιας συγκεκριμένης περιοχής του γενετικού υλικού. Συνήθως μιλάμε για γονίδια. Έγινε. Άρα αυτό είναι η PCR. Πώς την καταφέρουμε την PCR. Τι χρειάζεται. Τρία διαφορετικά στάδια που χρειάζεται. Τώρα δεν μιλάει μόνο η μηδεία. Μιλάει και η μία, ναι. Ναι. Περίμενε. Ναι, να τα γράφουμε κιόλας. Αν και τα ξέρετε. Απλώς θέλω λίγο... Τα λέμε αυτά τώρα, γιατί μετά θα δούμε τα κρίσιμα στάδια. Θα εισητήσουμε τα κρίσιμα στάδια στην PCR. Και αυτό που δεν έχετε εισητήσει, πιστεύω, τι κάνουμε όταν τα πράγματα δεν πάνε καλά. Αυτό είναι λίγο, αλλά για να δεις τι κάνεις όταν δεν πάνε καλά τα πράγματα, πρέπει πρώτα απ' όλα να ξέρεις τι γίνεται όταν υποθετικά πάνε όλα καλά. Λοιπόν, πρώτα απ' όλα, αποδιάταξη του DNA σε θερμοκρασία... Το υψηλή δεν σημαίνει τίποτα. 94, 95 βαθμή κελσίου. Τι συμβαίνει σε αυτή την αποδιάταξη, λοιπόν? Πάνε... Το δίκλωνο DNA γίνεται μονόκλωνο. Δεύτερο στάδιο. Ποιο είναι? Ναι, ναι, Ραφαήλ. Τι είναι? Βάζουμε κινητές. Όχι, κάθε φορά βάζουμε κινητές σε αυτό το στάδιο. Τι κάνουμε? Και κάποιος άλλος... Πες να μας πεις χρυσή. Δεν είσαι σίγουρη. Εκεί πέρα πίσω, καμιά κοπέλα φιλενάδα της Εύη, μίλησε και τα είπε σωστά. Κανένας άλλος... Ποιο είναι το... Το ξέρετε, παιδιά, δεν το δέχουμε ότι δεν το ξέρετε. Δηλαδή, θέλω να το πείτε. Ναι, το μικρό σου βάσο. Βριδισμός με τους κινητές. Ή αλλιώς μπορούμε να πούμε και σύνδεση των εκκινητών. Να τα γράφουμε και στα γλυκά. Ξέρετε και τους όρους στα γλυκά, θέλετε να τους πείτε. Δεν κοιτάω, μπορείτε να το πείτε χωρίς να βλέπω, λέγεται. Από διάταξη στα γλυκά. Δη... Δη... Διστράξιο... Δικροστράξιο, όχι. Δημετριασία. Εδώ σας θέλω. Βριδισμός, σύνδεση. Βριδισμός. Ναι, μεν η βριδισμός είναι Hibernation, αλλά... Αλλά πώς το λέμε αυτό, όχι. Ποιος ξέρει. Ναι. Πες του, δεν είναι, κανένα δεν σκοτώνουν εδώ πέρα. Ανίλινγκ. Ανίλινγκ. Σωστά, σχεδόν το έχεις. Παίρνεις εννιά με αριστερά δέκα. Ανίλινγκ. Αυτό είναι η σύνδεση των εκκεντών. Και σε τι θερμοκρασία γίνεται αυτό βάσο, οι φιλενάδες σου. Πόσο? Πόσο κάτι. Σε θέλω large, μη φοβάσαι. Βάλε κι άλλο. Κι άλλο. Κι άλλο. Επέκτηνε το, δεν είναι κάτι συγκεκριμένη θερμοκρασία το ανίλινγκ. Μπορεί να είναι ας πούμε από τους 40 ή μέχρι ίσως ακόμα και τους 60 βαθμούς που έχουμε το ανίλινγκ. Εντάξει. Και μετά, τρίτο στάδιο. Καλό. Με άλλον, τέλος πάντων. Τι συμβαίνει στο νυμβρισμό συνείδησης των εκκενητών. Αυτό δεν είπαμε. Πες βάσο μια που σε έχω τώρα και λες. Εδώ πέρα, σε αυτό το στάδιο, τι γίνεται εδώ πέρα. Ναι. Πού. Τι εννοείς με το συμπληρωματικό τμήμα. Άμα το δεις συνολικά, γιατί θέλω να το οπτικοποιείται κιόλος αυτό. Συνδέονται με το συμπληρωματικό τμήμα αριστερά και δεξιά από το γονείδι το οποίο μας ενδιαφέρει. Αυτό θέλω λίγο να βάζει. Δηλαδή ο ένας εκενητής θα πάει θα συνδεθεί αριστερά, ο άλλος εκενητής δεξιά. Έγινε. Και είμαστε στην επιμήκυνση ή σύνθεση. Που τη θερμοκρασία γίνεται αυτό. Ναι. 72 καλύτερα. Αυτό είναι λίγο πιο σταθερό. Που τι συμβαίνει εδώ πέρα. Προσθέτουν τα νουκλωτήδες, συνδέονται μεταξύ της σύμπληρωματικής αλυσίδας και οι βάσεις από τη δύο αλυσίδες και προχωράει... Προσθέτουν τα νουκλωτήδες στον συμπληρωματικό κλόνο, ξεκινώντας από το ένα εκενητή, οπότε προχωράει η επιμήκυνση ή σύνθεση της συμπληρωματικής αλυσίδας. Και πώς λέγεται αυτό το στάδιο στα αγγλικά. Extension ή και elongation μπορεί να το δεις. Ωραία. Από τα τρία στάδια ποιο είναι το πιο σημαντικό. Και αυτό γίνεται με τη βοήθεια της stack πολυμεράσης, από εκεί ξεκίνησαν όλα, που ακριβώς είναι στους 72 βαθμούς στη δουλειά, γιατί σε εκείνη τη θερμοκρασία δουλεύει η πολυμεράση. Στους 72 βαθμούς. Το 94-95 γίνεται σε αυτή τη θερμοκρασία, γιατί σε αυτή τη θερμοκρασία όλο το δίκλωνο DNA θα έχει γίνει μονόκλωνο. Στους 70 βαθμούς. Τι θα γίνεται εκεί πέρα, άμα προσποθούσαμε να κάνουμε από διάταιξη στους 70 βαθμούς. Ενδεχομένως κάποια τμήματα δεν θα ήταν μονόκλωνα, αλλά θα γίνονταν δίκλωνα. Αλλιώς κατεβαίνουμε θερμοκρασία, τόσο πτύνει το μονόκλωνο να γίνει δίκλωνο. Και γι' αυτό όταν φτάνουμε σε αυτή τη θερμοκρασία, τα μονόκλωνα τμήματα των εκκινητών πάνε και κολλάνε. Ποιο είναι το πιο κρίσιμο στάδιο από όλα αυτά. Το πιο δύσκολο στάδιο. Ο ευρωδισμός των εκκινητών. Είναι το στάδιο το οποίο θέλει το μεγαλύτερο πέδεμα. Και γιατί θέλει το μεγαλύτερο πέδεμα, γιατί από τι εξαρτάται. Πρέπει να ενωθούν τα σωστά τμήματα. Η φύση του υποστρώματος του γονιδίου είναι αυτό που θα καθορίσει σε τι θερμοκρασία θα το κάνουμε. Αυτό και δεν το ξέρουμε. Αυτό το ξέρουμε. Από διάταιξη πάντα εδώ πέρα σε αυτή τη θερμοκρασία θα γίνει. Αυτό το ξέρουμε. Η πημήκηση πάντως 72 βαθμούς θα γίνει. Αυτό δεν το ξέρουμε. Αυτό εξαρτάται πάντα από το γονίδι το οποίο μας ενδιαφέρει. Από τους εκκινητές τους οποίους έχουμε επιλέξει. Από το GC content και από διάφορα άλλα πράγματα. Από τη φύση της περιοχής. Μπορεί κάποιες περιοχές να είναι πιο δύσκολες. Εδώ παιδευόμαστε. Και εδώ ακριβώς είναι που θέλω λίγο να συζητήσουμε τι μπορούμε να κάνουμε. Εντάξει. Άρα το κρατάμε αυτό, τα σβήνουμε και μένουμε λίγο σε αυτό το στάδιο. Και τι μπορούμε να περιμένουμε να πάρουμε. Όταν κάνουμε PCR, τι περιμένουμε ως αποτέλεσμα. Πότε λέμε ότι έχουμε ένα πετυχημένο PCR. Τι είναι για σας. Αυτή σημαίνει ότι έχω ένα πετυχημένο PCR. Θα πάτε να κάνετε μια δουλειά σε έναν εργαστήριο. Θα πάτε να κάνετε μια διπλωματική. Πότε θα είναι πετυχημένο το PCR σας. Πες Χρυσή. Όταν θα πάρουμε σε μεγάλη ποσότητα το τιμί με αυτό που θέλουμε να ενισχύσουμε. Απαντήσαμε πλήρως. Πες, άμα θες να προσθέσεις και κάτι ακόμα. Πλήρες το θέλεις. Πλήρες θα το πάρεις αυτό το κομμάτι. Κάτι άλλο μου που θέλω να το πούμε και αυτό για να είμαστε πλήρως ικανοποιημένοι. Θέλεις να το πάρεις αυτό το κομμάτι το γονίδι που θέλεις να ενισχύσεις. Σε μπόλικη ποσότητα για να έχεις μετά να δουλεψείς. Αυτό το κάτω κάτω αυτός είναι ο στόχος σου. Να ενισχύσεις πολύ το DNA σου. Αλλά τι άλλο κάτι θέλουμε, ναι. Τι εννοείς με ποιότητα. Ποσότητα και ποιότητα. Πώς θεωρείς ότι θα είναι καλό αυτό το κομμάτι. Τι θα το κάνει καλό, αυτό ρωτάω. Ναι, θα το έχεις με ποσότητα. Αλλά τι άλλο πρέπει να έχεις ή να μην έχεις. Ναι. Η αλληλουχία των βάσεων διατηρηθεί. Γενικά, αν και η πολυμεράση κάνει κάποια λάθη, θα το θεωρήσουμε ότι συνήθως έχει κάνει καλή δουλειά και στην επιμήκυνση δεν έχει προσθέσει λάθος βάσης. Είναι ένα θέμα, αλλά δεν είναι το συνηθισμένο μας πρόβλημα. Ναι. Καλά το πας, πες το λίγο καλύτερα. Να είναι καθαρό αυτό και να μην είναι μπλεγμένο με κάτι άλλο. Για λίγο να το δουλέψουμε αυτό περισσότερο. Πώς μπορούμε να το καταλάβουμε καλύτερα αυτό. Πώς μπορούμε να το εννοήσουμε. Πάμε λίγο περισσότερο σε αυτό της μεταλλάξης που είπε και η Χρυσή. Όχι. Τι, ναι. Άλλος. Θα το πάρουμε, έτσι και λίγο το παίρνουμε. Και από τις δύο πλευρές το παίρνουμε. Αυτό λίγο να τεθούμε και τις δύο πλευρές συνισχύουμε. Να ανακλώνω και τον άλλον. Το πάμε ακόμα καλύτερα. Να πλέει η Ευαγγελία. Πες το λίγο ξανά πιο δυνατά. Την τελική φωτογραφία, ας πούμε, θα βάλουμε. Η τελική φωτογραφία μας δείχνει και το τι υπάρχει μέσα στο σωλινάκι μας. Στο τελικό αποτέλεσμα, να λες να μην πάρουμε τι. Αν δεν έχουμε κάνει, για παράδειγμα, το πείραμα σε στήρες συνθήκες, μπορεί να έχουμε κάποια μόλυνση και να πάρουμε γραμμή του DNA, που να μην είναι ουσιαστικά το τμήμα που θέλουμε, αλλά να είναι κάποιο άλλο, ξένο. Να πάρουμε ξένο DNA, να έχουμε επιμόλυνση. Εγώ σου λέω ότι μπορεί να μην έχουμε επιμόλυνση με ξένο DNA. Βάζουμε εμείς PCR για τα ψάρια μας. Εγώ σου λέω, εσύ λες να μην έχουμε επιμόλυνση από ανθρώπινο DNA και να πάρουμε ότι να είναι κάτι άλλο. Μπορεί να μην έχουμε επιμόλυνση από ανθρώπινο DNA, αλλά πάλι να μην είμαστε κανοποιημένοι. Γιατί δεν θα είμαστε κανοποιημένοι, ναι Άννα. Να πάρουμε και δευτερογενή προϊόντα. Το καλό το PCR δεν είναι μόνο ότι παίρνουμε σε πάρα πολύ μεγάλη ζώνη το γονείδι που μας ενδιαφέρει, αλλά δεν παίρνουμε και δευτερογενή προϊόντα, παραπροϊόντα στο PCR. Γιατί μπορεί εγώ να κάνω την ηλεκτροφόρησή μου και να δω ότι παίρνω μια τέτοια παχιά ζώνη, ότι έχει δουλέψει το PCR. Στις 1000 βάσεις, πες του τι είναι με την ηλεκτροφόρηση, και να πάρω κι άλλη μια τέτοια ζώνη στις 500 βάσεις. Είμαστε κανοποιημένοι? Με βάση άμα πούμε ότι θέλουμε να ενισχύσουμε σε μεγάλη ποσότητα το γονείδι που μας ενδιαφέρει, να το, δεν θα πρέπει να είμαστε κανοποιημένοι. Όχι, δεν είμαστε κανοποιημένοι, γιατί θέλουμε να ενισχύσουμε το γονείδι που μας ενδιαφέρει και μόνο αυτό. Έγινε? Λοιπόν, το μεγάλο μας πρόβλημα όταν βάζουμε PCR ποιο είναι. Αυτό, το να δουλέψει το PCR, δηλαδή να πάρεις τη ζώνη που σε ενδιαφέρει και μόνο αυτή τη ζώνη. Δύο πράγματα θέλουμε. Συγκεκριμένα να μπορούμε να έχουμε αυτή την κατάσταση. Και να δούμε λοιπόν πόσο μπορούμε να το πετύχουμε. Όλη η μανούρα και όλο το πέδεμα πάντα στο PCR είναι να τελειοποιήσεις τις συνθήκες της αντίδρασής σου για να παίρνεις τη ζώνη MEN, αλλά να παίρνεις μόνο αυτή τη ζώνη που σε ενδιαφέρει. Τι ζώνη θέλουμε να ενισχύσουμε εμείς τώρα σε αυτό το PCR που θα βάλουμε. Ποιος έχει διαβάσει. Το λέει μέσα στο φυλάδιο, το λέει τι ζώνη είναι. Αυτό το γωνίδιο, το κομμάτι του γωνιδίου που ενισχύουμε. Τι γωνίδιο είναι αυτό το κομμάτι που ενισχύουμε, όχι μη ένα ή μη δύο. Μη το χοντριακό. Τι είναι το χοντριακό. Μη το χοντριακό. Η del-loop. Πες το ρε Ιακλή εκεί πέρα δίπλα να βοηθήσεις λίγο. Κανέναν. Λοιπόν, θέλουμε την del-loop. Άρα λοιπόν, και τι κομμάτι είναι αυτό που ενισχύουμε. Περίπου χίλιες βάσεις. Να δούμε λοιπόν, γιατί πολλά λέω και τελειωμό δεν έχει. Τι θέλουμε να κάνουμε έστω ότι κάνουμε PCR. Εντάξει. Και το αποτέλεσμα του PCR μας είναι το ότι δεν παίρνω προϊόν PCR. Μια πολύ συχνή, συχνό αποτέλεσμα στο PCR. Αυτό που λέω πάντα. Μακάρι η έρευνα να ήταν πάντα πετυχημένη. Όχι. Θα βάλετε PCR και πολλές φορές δεν θα σας δουλέψει το PCR σας. Παρόλο που υποθετικά όλα αυτά που πρέπει να τα βάλετε εκεί πέρα τα έχετε βάλει. Ό,τι λέω τις ελεμεντές θα βάλω αυτό και θα ακολουθήσω αυτές τις οδηγίες, το έχετε κάνει. Τι μπορείτε να κάνετε για να αλλάξετε τις συνθήκες του PCR, ώστε τελικά να πάρετε το προϊόν αυτό που θέλετε. Μπορείτε να φανταστείτε. Ίσως που θερμοκρασία σε κάποιος θα δέχνει αποδιάδεξη. Ναι. Ποια θερμοκρασία, όντως θερμοκρασία πρέπει να παίξεις. Το υβριδισμό, προφανώς, οι άλλες εδώ οι θερμοκρασίες είπαμε ότι είναι σταθερές. Τι μπορέπει να κάνεις σε αυτή τη θερμοκρασία του υβριδισμού, ώστε τελικά να πάρεις προϊόν PCR. Να τη μειώσεις. Όντως πρέπει, όταν δεν μπαίνεις προϊόν PCR, πρέπει τη θερμοκρασία του annealing να τη χαμηλώσεις. Γιατί. Τι σημαίνει ότι χαμηλώνω τη θερμοκρασία του annealing. Ναι. Όχι, δεν έχει να κάνει με το ένισμο. Το annealing είμαστε. Το annealing τι είναι, ποια είναι η θερμοκρασία, τι καθορίζει το annealing. Να συνδεθεί ο εκκινητής με το υπόστρωμά μου. Άρα τι συμβαίνει εδώ πέρα, όταν χαμηλώνεις αυτή τη θερμοκρασία. Ναι, το κάνω πιο εύκολο στο DNA το μονόκλωνο να γίνει δίκλωνο. Άρα δίνω τη δυνατότητα στους εκκινητές που μπορεί όταν ξεκίνησαι από θερμοκρασία 60 βαθμούς τέλος πάντων. Παρ' όλο που υπάρχουν κάποιοι γενικοί κανόνες σχετικά με το GC από τι θερμοκρασία πρέπει να ξεκινήσεις. Ποτέ εγώ δεν τα παίρνω αυτά υπόψη. Βάζω ένα PCR και βλέπω ότι παίρνω. Άρα άμα πήραμε στους 60 αρχικά και δεν πήραμε προϊόν στους 60, τότε μπορείτε να είναι πολύ ψηλή η θερμοκρασία. Δεν κολλούσανε καλά οι κινητές μας εκεί που έπρεπε να κολλήσουνε, οπότε τελικά δεν μπορούσαμε να συνεχίσουμε μετά. Άρα χαμηλώνουμε τη θερμοκρασία και κάνουμε πιο εύκολο για τους εκκινητές να πάνε να κολλήσουνε. Αυτός είναι ένας τρόπος. Άλλος τρόπος που δεν έχει να κάνει με τη θερμοκρασία. Από τα διάφορα που μπορούμε να βάζουμε μέσα στο PCR μας. Πες το και το μικρό σου. Πες Χριστίνα. Κανείς δεν είναι σίγουρος ότι ζω έτσι κι αλλιώς. Α, τα ξέρετε πολλά εσείς. Πού τα συζητήσατε? Συγνητικένθρωπο. Τα διαβάσατε. Τι κάνουμε, την αυξάνουμε τη θερμοκρασία του χλωριούχου μαγνησιού γιατί να θυμάστε πάντα πάει αντίθετα. Το ένα κατεβαίνει και το άλλο ανεβαίνει. Γιατί? Κάποιος από εσάς, Στέφανε, Θεανό και οι υπόλοιποι. Ελεωνόρα, είσαι εσύ, ε? Πετάω φέτος. Το μαγνίσιο δεν είναι σημαντικά όμως. Το ενζύμιο, ναι. Τις πολυμεράσεις. Άρα, αυξάνει τη δραστικότητα της πολυμεράσης. Άρα, δουλεύει καλύτερα. Μπορεί να μην είχε αρκετό μαγνίσιο η πολυμεράση για να δουλέψει. Άρα λοιπόν, βάζω μαγνίσιο και αυξάνει τη δραστικότητα του ενζύμιου. Τις πολυμεράσεις. Δουλεύει καλύτερα και περιμένω να πάρω περισσότερο προϊόν. Κάτι άλλο που θα μπορούσαμε να κάνουμε. Ναι, βέβαια. Όχι, το μαγνίσιο μας ενδιαφέρει. Ναι. Η συγκέντρωση των υποκινητών. Των εκινητών. Γιατί τους λέτε υποκινητές. Γιατί τους λέτε υποκινητές. Οι κινητές είναι. Έτσι μάθατε. Εγώ τους λέω οι κινητές. Λοιπόν, η συγκέντρωση των εκινητών πάνω κάτω είναι στανταρισμένη. Δηλαδή πρέπει να κάνεις μεγάλα λάθη για να μη σου δουλέψουν. Κάτι άλλο συνήθως που έχει να κάνει με τους εκινητές. Μπορεί να μην είναι να χρειάζεται να αλλάξει η συγκέντρωση των εκινητών, αλλά τι να χρειάζεται να αλλάξει. Τους εκινητές αυτούς κατά αυτούς. Αλλάζω οι κινητές. Γιατί οι εκινητές είναι κάτι που σχεδιάζω με βάση του συγκεκριμένου γονίδου, γιατί θέλω να δουλέψω. Δεν σημαίνει ότι πάντα αυτοί οι κινητές που τους έχω σχεδιάσει, επειδή ξέρω την αλληλουχία σε αυτό το γονίδιο, μπορεί να δουλεύω με το ένα είδος ψαριού στην τελού και να έχω βρει αυτούς τους εκινητές από κάποιο άλλο είδος ψαριού. Ξέρω την αλληλουχία αυτή κατά αυτή εκείνης η αλληλουχίας. Όχι. Άρα μπορεί να μη δουλεύουν καλά, γιατί ακριβώς δεν πάνω να κολλήσουν καλά εκεί πέρα. Έγινε. Όλα αυτά μπορώ να αλλάξω, όταν δεν πάρω προϊόν PCR. Και έστω ότι σε μια άλλη περίπτωση παίρνω το PCR μου, αλλά παίρνω και δευτερογενείς ζώνες παραπροϊόντα, να το γράψω έτσι, παραπροϊόντα. Έστω ότι κάνω το PCR μου στους 50 βαθμούς και παίρνω παραπροϊόντα στους 50 βαθμούς. Τι πρέπει να κάνω τώρα εδώ? Επιμήκυνση, annealing, 50 βαθμή θερμοκρασίας. Τι πρέπει να κάνω? Ναι. Πρώτον, να αυξήσω τη θερμοκρασία. Να την πάω, ας πούμε, στους 53-55. Γιατί? Εδώ είναι λίγο πιο δύσκολο, ναι. Λίγο να το δούμε, ας το δούμε εδώ πέρα. Τι συμβαίνει όταν έχω τους εκινητές. Οι εκινητές μου είπαμε ότι έχω, για παράδειγμα, περιοχές στο DNA, το DNA μου είναι, και έχω και τους εκινητές μου. Οι εκινητές μου κολυμπάνε και αυτοί μέσα στο διάλειμμα. Όταν η θερμοκρασία πάει στους 60 βαθμούς, στην πρώτη περίπτωση ή οποτεδήποτε, υποτίθεται ότι θα πάνε, θα κολλήσουν οι εκινητές εδώ και ο άλλος ο εκινητής υποθετικά θα κολλήσει εδώ. Υποτίθεται ότι αυτό είναι το γωνίδι το οποίο με ενδιαφέρει, εντάξει. Για να κολλήσουν αυτοί οι εκινητές, υποτίθεται ότι θα πρέπει να είναι καλά σχεδιασμένοι, οι εκινητές είναι πόσο νουκλωτήδια συνήθως? 20 νουκλωτήδια. Άρα ένας καλός εκινητής θα πρέπει να έχει ομολογία 20-20. Που σημαίνει ότι κολλάει εδώ πάρα πολύ καλά. Έστω ότι υπάρχει και μια άλλη περιοχή, ένα ψεύδο γωνίδιο, που μοιάζει με αυτό το γωνίδιο, το οποίο προφανώς, ως ψεύδο γωνίδιο, έχει αρχίσει να αλλάζει σε σχέση με το κονονικό μου το γωνίδιο και έχει κάποιες μεταλλάξεις. Άμα είναι πολύ χαμηλή η θερμοκρασία που κάνουμε το PCR, μπορεί να κολλήσει εδώ πέρα. Ας το αλλάξω το χρωματάκι, να φαίνεται, ας πούμε, ότι είναι μένα, αλλά δεν είναι. Αλλά εδώ πέρα πέστε το τι. Επειδή έχουν γίνει και μεταλλάξεις αυτές τις περιοχές σε αριστερά και δεξιά, μπορεί να έχω ομολογία 16-20. Σε χαμηλή θερμοκρασία δεν υπάρχει αυστηρή ανάγκη να υπάρχει ομόλουτη ομολογία. Έχει τάχη στο DNA και αλλιώς έχει μια ανάγκη να κάνει ζευγάρι το DNA για κινητές. Άρα σε χαμηλή θερμοκρασία θα πάει και θα κολλήσει κάπου αλλού επίσης. Και μετά εμείς τι θέλουμε, να του βάλουμε δύσκολα. Αντέχει αυτός ο ασοδεσμός τα δύσκολα. Η ψηλή θερμοκρασία είναι τα δύσκολα. Άμα το ανεβάσουμε το 50 και το πάμε στους 55, τότε εκεί πέρα αρχίζουν τα δύσκολα. Ένας ισχυρός δεσμός θα αντέξει και στα δύσκολα. Ένας όχι τόσο καλός δεσμός δεν θα αντέξει. Άρα στους 55 πια οι κινητές θα πάει και θα βρει το κατάλληλο το τέρι του εδώ πέρα. Και θα αντέξει και δεν θα πάρουμε παραπροϊόντα. Γι' αυτό θέλουμε να αυξήσουμε τη θερμοκρασία. Το καταλάβατε? Τι άλλο μπορούμε να κάνουμε? Να αλλάξουμε πάλι τους κινητές. Να αλλάξουμε τους κινητές. Μπορεί οι κινητές που κάναμε να είναι για πέταμα. Άρα και εδώ πάλι αλλαγή κινητών. Κύριε, γίνονται οι κινητές να έχουν αλλαγή σε άλλη περιοχή και να έχουν αυτοί ομολογία. Αλλά μην το ξέρουμε. Και δε γι' αυτό να παίρνουμε. Πας να κάνεις ενίσχυση γονιδίων στο σολομό, που είναι ένα παλιό τετραπλοϊδές είδος. Που σημαίνει ότι έχουμε διπλασιασμό γονιδίων, ολόκληρον του γονιδιώματος. Πας να κάνεις ενίσχυση γονιδίων σε φυτά που έχεις πολυπλοϊδίες τρελές. Εκεί πέρα τι σημαίνει το ότι δεν ενισχύεις μόνο ένα γονίδι, μπορεί να ενισχύσεις και όλα τα υπόλοιπα της οικογένειας των γονιδίων. Και τρέχα γύρευε. Και τρεβάς τα μαλλιά σου απλώς, δεν κάνεις τίποτα άλλο, μέχρι τελικά να καταφέρεις αυτό που θες. Τι άλλο μπορούμε να κάνουμε? Να μειώσουμε τον χλωριόχο μαγνύσιο. Να μειώσουμε τον χλωριόχο μαγνύσιο. Γιατί να το μειώσουμε τώρα, γιατί μπορεί το γεγονός ότι παίρνουμε παραπροϊόντα, να μην έχει να κάνει με το που συνδέονται ακριβώς οι κινητές, αλλά οι πολυμεράσεις μας έχουμε βάλει τόσο μαγνύσιο που υπερδουλεύει. Και πάει και μας δίνει και διάφορες άλλες ζώνες. Δουλεύει τόσο πολύ, που οπουδήποτε πάει έστω και λίγο ένα κολλημένο σε ένας κινητής, αστεί αρχίζει να προσθέτει. Ναι. Την πολυμεράστη τι σταματάει για να τελειώσει το τελειώνκι τώρα. Τίποτα δεν τη σταματάει. Συνεχίζει μέχρι τέλος. Ναι, τώρα πώς να σου το δείξω αυτό. Τελειώσαμε με αυτό. Να το σβήσω. Τι συμβαίνει στο PCR. Στους πρώτους κύκλους τίποτα δεν τη σταματάει. Αλλά τι γίνεται. Πρώτος κύκλος PCR που έχει ανοίξει το γωνίδιό μας. Θα πάει, θα συνδεθεί οι δύο κινητές, θα δουλέψει εδώ και θα δουλέψει εδώ. Κανονικά το γωνίδιό μου είναι από εδώ μέχρι εδώ, εντάξει. Άρα λοιπόν, στον πρώτο κύκλο θα πάρεις και κομμάτια, τα οποία είναι και πιο μετά από εκεί που θέλουμε. Στον πρώτο κύκλο. Ανοίγουν αυτά. Οπότε θα έχεις πια κομμάτια. Να το δω. Εντάξει, θα έχεις κομμάτια τα οποία είναι από εδώ και από εδώ μακριά, από εδώ μυκισμένα. Αλλά τώρα ξεκινάει πια και η πολυμεράση, οι κινητές. Θα κολλήσουν οι κινητές και σε αυτά τα κομμάτια. Ναι, και εδώ. Άρα λοιπόν, στον δεύτερο κύκλο, πέρα από αυτά τα κομμάτια που είναι μεγαλύτερα, αρχίζεις και αποκτάσεις τα κομμάτια που είναι αποκλειστικά και μόνο το μέγεθος που θέλεις. Και ενώ τα υπόλοιπα αυξάνονται γραμμικά, αυτά τα κομμάτια αυξάνονται εκθετικά. Οπότε στο συνολικό σου PCR έχεις και μερικά κομμάτια, τα οποία ναι μεν είναι λίγο μεγαλύτερα επειδή δεν υπάρχει τέλος, αλλά επειδή σιγά σιγά αρχίσουν και δημιουργούνται κομμάτια τα οποία έχουν αρχή, όταν ξεκινάς από το τέλος έχουν και πού να σταματήσουν. Αυτό είναι μια λεπτομέρεια της λεπτομέρειας, αλλά ναι, ισχύει. Και άμα δεν καταλάβατε δεν έχει σημασία. Έγινε? Τελειώσαμε. Τι θέλουμε τώρα από εδώ και πέρα να κάνουμε. Έχετε δύο πράγματα να κάνετε. Ένα, να ηλεκτροφορήσει το DNA σας. Άρα ο καθένας από εμάς πάει στη συνέθουσά του. Αυτό που θα κάνουμε είναι... Θέλουμε να ηλεκτροφορήσουμε. Έχουμε 6 ομάδες. Δεν χρειάζεται να ηλεκτροφορήσετε όλοι σήμερα. Γιατί σκεφτείτε ότι θα βάλετε ηλεκτροφόρηση και να ελέγξετε το PCR σας την επόμενη φορά και να ελέγξετε και το αποτέλεσμα της πέψης του PCR σας. Άρα λοιπόν, δεν χρειάζεται σήμερα όλοι να φορτώσουν. Τουλάχιστον ένας από ομάδα χρειάζεται. Άντε πέστε και δύο. Παραπάνω όχι. Οι υπόλοιποι κάθονται, κάνουν φασαρία... Δεν κάνουν φασαρία. Δεν κάνουν φασαρία, πάνε έξω και τα λοιπά. Και οι υπόλοιποι της ομάδας φορτώνουν. Θέλω κάποιον, αναέθουσα, ο οποίος θα είναι ο γραμματέας που θα καθίσει και θα γράψει ότι τώρα φορτώνω στο πηγαδάκι 1 η πρώτη ομάδα, μετά η ομάδα 2. Για να ξέρουμε τη σειρά οργάνωση σε ένα εργαστήριο, χρειάζεται να ξέρουμε πάντα τι κάνουμε. Άρα κάποιος θα ξέρει τι θα κάνουμε. Ένα αυτό. Δεύτερον είπαμε ότι φορτώνουμε. Α, και μετά. Υποθετικά τι πρέπει να κάνουμε. Πρέπει να βάλουμε, να φορτώσουμε, να περιμένουμε μισή ώρα, να δούμε το αποτέλεσμα της ηλεκτροφόρησης και μετά να αρχίσουμε να ετοιμάζουμε το PCR. Η ώρα είναι 11. Άμα το κάναμε αυτό, τότε θα φτάναμε 12 και δεν θα τελειώναμε ακόμα. Άρα τι θα κάνουμε. Με το που τελειώνεται την ηλεκτροφόρηση, εσείς σας φέρνουμε να ετοιμάσετε να ξεκινήσει το PCR σας. Πώς γίνεται αυτό? Πώς γίνεται να βάλετε PCR χωρίς να έχετε λέγκες στο DNA σας. Εδώ σας θέλω. Εδώ θέλω πονηριά. Ε, το έχουμε λέγκες εμείς. Εντάξει. Άρα είμαστε εμείς πιο πονήρια από σας. Άρα, λοιπόν, εμείς ξέρουμε τι DNA είχατε, τι βγάλατε. Σε όσους χρειάστηκε να αλλάξουμε το DNA, το αλλάξαμε ήδη. Έγινε. Ε. Για να δείτε, για να μπείτε στο μυαλό σας ποια είναι η διαδικασία. Γιατί είναι εργαστήριο, δεν είναι το αποτέλεσμα. Όλοι ήταν άψογοι. Εντάξει. Πάμε δίπλα και αναομάδα αποφασίζετε ποιος θα ηλεκτροφορήσει. Έγινε. Λοιπόν, έχω τα δείγματά σας εδώ πέρα. Α1, Α2, κτλ. Για, ελάτε να τα πάρετε. Μάλλον όχι, δεν τα πάρετε, θα τα αφήσω εδώ πέρα. Λοιπόν, ελάτε λίγο εδώ. Επειδή λίγο περνάει και η ώρα, θα τα κάνουμε λίγο πιο γρήγορα θα πάμε. Λοιπόν, ελάτε, ελάτε, ελάτε, ελάτε, ελάτε. Να φέρω το ζελταδάκι. Θα το κάνω εγώ τώρα. Περίμενετε, καθίστε λίγο γύρω γύρω και θα τα δούμε. Περίμενε λίγο. Λοιπόν, πρώτα απ' όλα, όπως βλέπετε, εδώ δεν έχουμε καθόλου την B. Άρα πρέπει να βάλουμε την B. Εντάξει. Που δεν έχουμε την B και πρέπει να βάλουμε την B, πρέπει να ετοιμάσουμε. Για να μην πεδευόμαστε πάρα πολύ. Το κάνω εγώ. Ωπα, τι έγινε. Λοιπόν, τώρα αυτό νομίζω ότι θέλει περίπου 500 ml για να το γεμίσουμε. Πόσο θα βάλω, την B πέντε π. 100 ml την B. Ε, όντως, ευχαριστώ. Κομπλέ. Το κομπλέ. Και δεν υψιάσουμε, το λένε. Πότε ακριβώς έγινε της μόδας το κομπλέ, σαν έκφραση. Όχι, πιο πιο έξω. Ποιος είναι ο μοδάτος. Ποιος το λέει. Ο πιο μοδάτος. Αλίμονο. Ξέρεις την προέρευση. Για πες. Είναι από το γαλλικό κομπλέ που σημαίνει πικανοποιό. Κομπλετέ θα είναι αυτό τότε. Κομπλετέ είναι πληρών. Ε, ολοκληρών. Ε, το ρήμα. Όχι, κομπλέ είναι το ρήμα. Κομπλέ. Το ρήμα που κλείται να είναι το κομπλέ. Γιατί πάντε με το απαρέμφατο. Με το απαρέμφατο πάντε, δεν πάμε στα γαλλικά. Κομπλέ. Ε, ok, εντάξει. Δεν ξέρω καλά γαλλικά, ok. Λοιπόν, δεν θα μας φτάσει. 600 ήθελε. Αφού ήθελε 600, θα βάλουμε κι άλλα 100. Άρα 20. Άρα 600 ήθελε. Ναι, 600 σημαίνει 20.80, όχι 20.90. Τώρα επειδή είπα πολλά, λίγο μείναμε πίσω. Τι κάνω, γιατί δεν με σταματάτε. Πρέπει να το ξανακάνετε αυτό. Ναι, γιατί είχα βάλει 20 και ήθελα να βάλω κι άλλα 80 μέχρι το 100. Νομίζω ότι είχα βάλει 20, τα άριξα και μετά ήθελα άλλα 80. Ok, ό,τι ποιος βιάζεται και τώρα βιάζουμε αυτή τη στιγμή. Τα 20 τα έριξατε μέσα. Όχι, τα πέταξα εκεί, δεν τα έριξα. Δεν με σταματάει κανείς σας όμως. Εδώ. Δεν ήθελα να σου πληρώσω. Καλά το κάνω. Ναι. Λοιπόν, ok. Φέρετε τώρα το ζελεδάκι. Λοιπόν, ας βάλω γάντια. Καλά, έπαιρνε η κάμερα. Βγάζουμε τις χτένες με προσοχή. Βγάζουμε και αυτή τη χτένα, αυτή και πιο εύκολα. Λοιπόν, το βάζουμε έτσι. Μια χαρά έχει καλύψει το ρυθμιστικό διάλειμμα όλο το τζέλ. Και είμαστε έτοιμοι για να ελεκτροφορήσουμε. Για να ελεκτροφορήσουμε τώρα, τι χρειάζεται να κάνουμε. Ξέρετε αν ελεκτροφορείτε, έχετε κάνει κι άλλη φορά. Έχετε... Ποιος θα είναι ο γραμματέας? Ηρακλή. Ο Ηρακλής. Εδώ είναι τα δείγματά σας. Τι χρειαζόμαστε? Έχουμε το παραφίλμ. Στο παραφίλμ θα βάλουμε το διάλειμμα φόρτωσης. Συνήθως θέλουμε ένα με δύο μικρόλυτρα διάλειμματος φόρτωσης και το υπόλοιπο DNA. Τέσσερα, πέντε, πόσο λέει εκεί πέρα να φορτώσετε υποθετικά. Λέει πουθενά σε αυτό ή όχι. Πόσο? Λοιπόν, το διάλειμμα φόρτωσης. Τι είναι αυτό το διάλειμμα φόρτωσης? Τι το χρειαζόμαστε? Τι το χρειαζόμαστε το διάλειμμα φόρτωσης, το loading buffer. Ναι, κάτι κάνει προφανώς, αλλά τι χρειάζεται, ναι. Τι έχει μέσα το διάλειμμα φόρτωσης, το λέει. Κοιτάξτε. Πόνο χρυστική έχει. Και είναι τα δύο τα μπλε. Μπλε με θηλενίου και κοιανού του ξηλενίου. Καλά τα λέω, δεν τα θυμάμαι και ώρες ώρες, δεν δουλεύει. Και γλυκερόλοι. Τι τα θέλουμε αυτά, ναι. Για να μην τρέχει πολύ το DNA και να το συγκρατεί. Να το συγκρατεί, τι εννοείς να το συγκρατεί, πού θα πάει δηλαδή. Δεν είναι αυτό. Το λες και δεν το λες. Αλλά εκεί κάπου το χάνεις. Τι το θέλω αυτό. Πού το χρειάζομαι. Ναι, γλυκερόλοι. Άσ' την αφιδάτοση. Ξεχάστε το αυτό τώρα. Γλυκερόλοι. Έχετε κάνει και ηλεκτροφόρηση πανά θεμά σας. Πρέπει να το ξέρετε, πρέπει να μου πείτε όλο αυτό. Εμείς επαγγελματίες. Τι συγχωρέσουμε. Πες. Τι χρειάζομαστε για να δούμε πότε θα φτάσει η ηλεκτροφόρηση. Πότε θα φτάσει πού. Στο τέλος. Σε ποιο τέλος. Τι ξέρω. Για να δούμε την προοδότης. Να δούμε την προοδότης. Για πότε τι να ξέρουμε. Πότε να τη σταματήσουμε. Για να μην κάνουμε βλακία. Ναι, βασικά να μην κάνουμε βλακία. Όχι να μην έχουμε κάνει βλακία. Γιατί θα τη δούμε την προοδότης. Γιατί θα κολλήσουν αυτά με το DNA και θα ξανακατεβαίνουν μαζί. Ωραία. Πώς μαζί. Δεν κατεβαίνουν ακριβώς μαζί. Τρέχουν δύσκολα. Ναι. Οι χρωστικές αυτές τρέχουν και οι δύο γρήγορα τρέχουν. Μπορεί να το ψάξεις και να μου το πείτε την επόμενη φορά. Και οι δύο όμως τρέχουν κινητικότητα αντίστοιχη με μικρά μόρια DNA. 20 βάσεις, 30 βάσεις, κάπου εκεί πέρα. Άρα λοιπόν τι σου δείχνουνε το μέτωπο της ηλεκτροφόρησης. Ξέρεις ότι άμα αρχίσεις και φτάνει η χρωστική στο τέρμα του τζελ, βγάλ' το γιατί θα έχουμε προβλήματα άμα το ξεχάσεις. Άρα γι' αυτό θέλεις τις δύο τους χρωστικές. Τη γλυκερόλη δεν τη θέλουμε για φιβάτοση. Γιατί τη θέλουμε. Είναι αυτό που έλεγες πιο πριν. Αυτό που είπας ότι πρέπει να ξέρουμε και τα λοιπά. Αυτό εννοούσαμε, να βλέπουμε το μέτωπο της ηλεκτροφόρησης. Αυτό ήθελα να μου πεις. Αλλά τη γλυκερόλη τι τη θέλουμε. Παναθυμάζεις που έχετε κάνει και ηλεκτροφόρηση και πολλές φορές και λέτε, πάλι τα ίδια θα κάνουμε, πάλι ηλεκτροφόρηση. Αμάντια, αφού τα ξέρουμε. Έχω άδικο. Η γλυκερόλη. Η γλυκερόλη τι είναι, κάνει τον DNA μας πιο βαρύ. Οπότε λοιπόν, την ώρα που θα το βάλεις στο πηγαδάκι, άμα βάλεις χωρίς τη γλυκερόλη, θα διαχειθεί. Με τη γλυκερόλη γίνεται πιο βαρύ και τσουπ, θα πέσει μέσα στο πηγαδάκι. Εντάξει. Αυτό το χρειάζεσαι. Τώρα, loading buffer. Αυτό είναι. Εγώ αυτό που θα κάνω είναι, θα σας ετοιμάσω, θα βάλω εδώ πέρα, το ένα-δύο μικρόλυτρα του loading buffer και εσείς θα άρχισετε, θα παίρνετε, ο λάντερ είναι έτοιμος, θα πάρετε το γωνιδιωματικό DNA, τα υπόλοιπα DNA που έχετε, θα πάρετε πέντε μικρόλυτρα, θα πάρετε εσείς, βάλτε τα, στα δύο μικρόλυτρα που θα είναι έτοιμα του loading buffer, βάλτε την, δέκα λέει, θα πάρετε τα δέκα μικρόλυτρα του DNA, θα τα αναμίξετε με τα δύο μικρόλυτρα του loading buffer, θα βάλετε την πιπέτα μετά στα δώδεκα, θα το πάρετε και θα φορτώσετε. Εντάξει. Αυτή βέβαια είναι δεκάρα, οπότε δεν μπορείτε να πάρετε δώδεκα με αυτήν. Κι η πίστη δεν μπαίνει και καλά. Ναι, ποιος? Γεια σας. Να πάρετε βέβαια. Παρ' το και δύο. Με αυτόν τον τρόπο ετοιμάζω στα γρήγορα. Αυτό είναι περίπου ένα με δύο μικρόλυτρα και άμα πέσει και παραπάνω και πέσει και λιγότερο δεν πάθαμε τίποτα, δεν κάνουμε κάτι συγκεκριμένο, ήθελα απλώς να δούμε τι γίνεται. Λοιπόν, πετάμε εδώ πέρα. Το λάντερ να το βάλουμε τελευταίο. Κύριε Γραμματέα, θέλω να βάλεις το γονιδιωματικό. Λοιπόν, έχουμε τα έξι τα δείγματα και θα έχουμε και ένα δείγμα που είναι καλό γονιδιωματικό DNA. Σαν σύγκριση. Πέντε θα βάλεις από αυτό όμως, εσύ δεν θα βάλεις δέκα. Εντάξει. Παίρνεις DNA. Έλα από εδώ. Όχι, αυτό είναι λάντερ ας το μετά, το βάλουμε. DNA. Αυτό είναι το γονιδιωματικό μας το DNA το καλό. Πάρε πέντε από αυτό. Για πέτα με, είναι έτσι και έτσι. Έχουμε μπόλικο από αυτό. Πρέπει να είναι DNA από λουκάνικα, κάτι τέτοιο. Δεν έχει σημασία DNA, εμείς θέλουμε να πούμε απλώς να είναι καλή ποιότητα DNA. Βάλεις το πέντε, ωραία. Βάλεις το εφτά τώρα την πιπέτα σου. Γιατί κολλά, γιατί είναι παραφελή. Φέρτε και μια άλλη πιπέτα 20 από εκεί πέρα. Ρίθμισε το στα εφτά. Να σας θυμίσω πώς κάνουμε η ηλεκτροφόρηση. Περίμενε λίγο πριν ξεκινήσεις. Το σημαντικό είναι να έχεις σταθερό χέρι. Εγώ αυτό που προτείνω είναι, έστω ότι θα το πάρεις αυτό που θα πάρεις, το παίρνεις σιγά σιγά, και μετά μπορείς με το άλλο το δάχτυλο να καθορίζεις, να κρατάς σταθερό το τιπ. Αυτό είναι, μην το φοβηθείτε. Κρατάτε σταθερό το τιπ. Βάζεις το τιπ πάνω από το πηγαδάκι και σιγά σιγά αφήνεις να πέσει. Δεν χρειάζεται να είναι πολύ βαθιά το τιπ μέσα στο πηγαδάκι, γιατί ακριβώς είπαμε ότι έχει γλυκερόλοι. Άρα, αφού έχει γλυκερόλοι, θα πέσει αυτό. Είναι βαρύ, θα πέσει μέσα στο πηγαδάκι. Και μετά το πιο σημαντικό είναι, πρώτα σηκώνεις την πιπέτα, μετά σηκώνεις το δάχτυλο, γιατί αλλιώς θα κάνει την αναρρώφηση. Δικό σου. Για πλύση. Για πλύση. Γιατί τη χρησιμοποίησα τόσο πολύ αυτό τον καιρό, πες. Ε, ναι. Τι, γιόγκα, ε. Λοιπόν, σε αυτή τη σκάλα θέλω να το κάνεις, το θέμα είναι να φαίνεται. Τι βλέπεις, το βλέπεις. Το κόκκινο. Κάντε, βάλτε το εδώ πέρα. Μπράβο, εδώ θα βάλεις το κόκκινο. Περίμενε λίγο, περίμενε. Πιέσε λίγο, γιατί έχεις αέρα μέσα στο τιπάκι σου. Να φύγει ο αέρας. Πιέσε σιγά σιγά, θα φύγει. Φεύγει, δεν φεύγει. Περίμενε, κάνε το εδώ πέρα καλά. Άμα έχει αέρα το τιπάκι σου, την ώρα που πας να φορτώσεις θα σου δημιουργήσει φυσαλίδα και δεν θα θες αυτό το πράγμα. Ωραία, μια χαρά. Ωραία. Φύγε λίγο, δεν πειράζει. Ωραίος. Πιο ψηλά το τιπ, πιο ψηλά το τιπ. Το χώσες πολύ μέσα. Εντάξει, έγινε. Είναι αυτό που είπα. Δεν χρειάζεται να το χώσει πολύ μέσα το τιπ. Από ψηλά χρειάζεται να υπάρχει. Ωραία. Ο επόμενος. Ένα άτομο, δύο άτομα, τρία άτομα. Ένα ή δύο άτομα πανά ομάδα θέλω. Bolko DNA έχουμε. Η α1. Ο γραμματεές κρατάει στοιχεία. Ποιος φορτώνει και πότε φορτώνει και σε ποιο πηγαδάκι φορτώνει. Παίρνεις με δέκα αυτό και μετά έχεις το δεκάρα. Για να το ξαναρώνουμε. Αναλαμβάνεις να βοηθάς κιόλας. Πάρε πρώτα από όλα δέκα μικρόλυτρα. Άρα στο ένα βάλαμε το τέτοιο. Μπράβο. Το δικό μου. Πρόσεξε, πρόσεξε. Θυμηθείτε ότι είναι σπασμένα τα επεντορφ τα καπάκια. Να τους λέσεις ότι είναι σπασμένα τα επεντορφ τα καπάκια. Τι έγινε. Ναι δεν σου κάνει. Πέτατο. Τώρα σε λίγο θα είσαι μια χαρά από δίπλα. Τους έχεις όλους. Παίρνει δέκα μικρόλυτρα. Πείτε ένα είτε δύο όπως θέλετε. Δεν έχω θέμα αλλά όχι παραπάνω από δύο. Το κλείνεις μετά. Μπορεί να σε βοηθάει και κάποιος από την ομάδα σου επίσης. Δεν ψηφίγατε ποτέ. Βλέπε εδώ τι κάνει. Όμως κιόλας. Γιατί δεν έχεις λίγο πιο κατακόρυφη την μπιπέτα. Ναι. Και αυτό το χέρι δεν χρειάζεται να κρατάς τον ακόνο σου. Ναι. Ναι. Ναι. Μην το φοβάσαι. Ωραία. Έγινε. Άνοιξε. Μπράβο. Κάνει τρελή ζέστη. Παίρνεις την άλλη. Ωραία. Οι υπόλοιποι μπορείτε να κάνετε διάλειμμα άμα δεν θέλετε. Να φορτώσετε. Ή να βλέπετε. Δεν υπάρχει θέμα. Έτσι. Καλύτερα. Ωραίος. Τώρα πιέζεις μόνο να μην σου φύγει η φυσαλίδα. Ας φύγει. Να μην υπάρχει φυσαλίδα εκεί μέσα. Ωραία. Άψοχος. Τράβα λίγο να ρουφήξει ελάχιστα μέσα. Εντάξει. Έγινε. Δίπλα στο 2. Εκεί είσαι. Άψοχος. Ωραίος. Σου βάζω 9. Και αυτό να το γράψω. Ότι του βάζω 9. Όχι. Δεν έχει. Πέτατο. Το επόμενος. Έχει μια ομάδα είτε από κάποια. Εντάξει. Το τελευταίο που χρειάζεται να κάνουμε είναι... βάλαμε ένα γονιδιωματικό DNA sun control. Βάλαμε τα δικά σας τα DNA. Θα βάλουμε και ένα λάντερ. Υποθετικά ο λάντερ που χρειαζόμαστε βέβαια... πρέπει να είναι λάντερ... μωριακή σκάλα... για μεγαλομωριακό DNA. Και υπάρχει λάντερ που είναι 1000 βάσεις, 2000 βάσεις... 5000 βάσεις και δεν ξέρω τι. Δεν έχουμε εμείς στο εργαστήριο... γιατί δεν υπάρχει λόγος. Έχουμε κυρίως για μικρά μεγέθη... που εκεί μας χρειάζεται να καταλάβουμε. Παρ' όλα αυτά θα το βάλουμε... έστω και για να υπάρχει και σαν σύγκριση. Λοιπόν, βάλαμε και αυτό. Το DNA τι είναι... αρνητικά ή θετικά φορτισμένο... προς τα πού πάει... προς το sin λοιπόν. Άρα λοιπόν... αφού όσον είναι το sin... πρέπει να το βάλουμε... και να το βάλουμε... και να το βάλουμε... και να το βάλουμε... και να το βάλουμε... και να το βάλουμε... και να το βάλουμε... clock. Αφού όσον είναι το sin... το είναι λίγο ανάποδα... αλλά αυτό... που θα πρέπει να πάει στο sin. Γιατί προς τα δω θα πάει το DNA. Άρα αυτό πάει εδώ... και αυτό πάει εδώ. Το έχουμε στην πρίζα... το έχουμε στην πρίζα. Για να δούμε πόσο... Και ξεκινάει και τρέχει. Λοιπόν, το DNA θα αρχίσει να μετακινείται σιγά σιγά προς το συν. Λίγο σας υπενθυμίζω ότι είχαμε βάλει εμείς δύο οχτένες. Μια στη μέση και μια πάνω πάνω. Εμείς φορτώσαμε στη μέση. Το κάναμε τυχαία ή το κάναμε επειδή είχαμε κάποιο λόγο? Που φορτώσαμε στη μέση και όχι πάνω. Έτυχε ή πέτυχε? Δεν έτυχε. Δεν έτυχε. Γιατί? Γιατί αν μην κάναμε έστω μια πλατεία και τα βάζαμε ανάποδο, θα πήγαιναν προς τα πάνω και θα πάρουν πάλι αφού τα ρίσμα. Ναι, λέει ο Ραφαίλης ότι δεν έτυχε, το κάναμε συγκεκριμένα, επειδή άμα κάναμε λάθος θα είχαμε τη δυνατότητα, άμα κάναμε λάθος τα ηλεκτρόδια, θα είχαμε τη δυνατότητα να πάει και προς τα πάνω, ας πούμε, και δεν θα το χάναμε. Μια προσέγγιση είναι αυτή, εμείς θεωρούμε όμως ότι δεν θέλουμε να κάνουμε λάθη. Ρώτα, ναι. Σε ποια από τα δύο βαθύλωμα τα βάλαμε? Αυτό λέω, στη μεσαία, βάλαμε στη μεσαία τεχθέν, όχι στην πάνω-πάνω. Ναι, αλλά είναι αυτή που δημιουργεί πιο μεγάλα... Δεν έχει σημασία αυτό, ξέχασέ το. Πιστεύω ότι τα βάλαμε στη μέση, για να μην έχουμε αργότερα, ας πούμε, να μην μας εμποδίσει το βαθύλωμα το οποίο σκατεβαίνει τους όρους. Είναι μια ιδέα αυτή, το ότι όντως, άμα το βάζαμε πάνω-πάνω και το αφίζαμε να τρέξει, τότε κάποια στιγμή θα απευτε το DNA επάνω στη μεσαία τεχθένα. Όντως, ισχύει αυτό το πράγμα. Ναι. Θες κάτι να προσθέσεις? Εδώ ξέρουμε μόνο να λέξουμε αν είναι με DNA. Δεν πρόκειται να το τρέξουμε τόσο ώρα, όμως έτσι κι αλλιώς. Ναι, δεν θα μας πείραζε ιδιαίτερα. Δεν μας πειράζει ποιο ζώο αυτό το πράγμα. Όντως, δηλαδή, συγκεκριμένα, τώρα δεν μας πειράζει. Είτε το βάζαμε πάνω, είτε το βάζαμε στη μέση, αυτή τη στιγμή δεν έχει σημασία, αλλά, πότε θα έχει σημασία, άμα θέλαμε να τρέξει πάρα πολύ, ναι. Επίσης, τι άλλο. Θα το κόψουμε πρώτο και μετά για να ξεχωρίσουμε τα μικρά χρόνια με το πρώτο και μετά. Θα έλεγα κάτι άλλο. Θα έλεγα το τι. Άμα θέλαμε να το ξεχρησιμοποιήσουμε αυτό το τζέλι, πρέπει να το χρησιμοποιήσουμε, σκεφτείτε ότι άμα φορτώναμε πάνω και το αφήναμε να τρέχει, τότε κάποια στιγμή αυτό το τζέλι θα πέφτει και σκάτω στις ζώνες, οπότε θα το χάναμε, αυτό το τζέλι. Θα πήγαινε στράφει. Άρα, λοιπόν, με αυτόν τον τρόπο κάνουμε οικονομία. Φορτώνουμε στη μέση, τρέχει το DNA, ενώ πάνω μένει ανέπαφο το κομμάτι, οπότε δεν μπορούμε να το ξεχρησιμοποιήσουμε. Άμα θέλουμε να κάνουμε οικονομία, εμείς δεν έχουμε θέμα οικονομίας, είμαστε large. Και επίσης και κάτι άλλο, το βρωμιούχο αιθίδιο, πώς μετακινείται, ξέρετε, προς τα κάτω ή προς τα πάνω πάει το βρωμιούχο αιθίδιο. Προς τα πάνω πάει, πάει αντίστροφα. Πάει προς το πλήν το βρωμιούχο αιθίδιο. Άρα, λοιπόν, όσο περνάει η ώρα, το βρωμιούχο αιθίδιο φεύγει από κάτω. Άρα, άμα χρησιμοποιούσαμε ένα τζέλ από την κάτω πλευρά και μετά, που είχε τρέξει πριν από πολύ καιρό, θα χάνουμε το περισσότερο το βρωμιούχο αιθίδιο. Και ένας ακόμα λόγος που μας βολεύει αυτό. Τώρα, σε πάνω πολλές λεπτομέρειες, πολλά λέμε PCR. PCR, γιατί πέρασε και η ώρα. Λοιπόν, αναομάδα έχετε στα χαρτιά εκεί πέρα τις ποσότες που έχετε να βάλετε. Τα DNA σας που σας έχουμε ετοιμάσει εμείς είναι ήδη εδώ πέρα. Τα έχουμε ήδη βάλει εμείς, δεν θα καθίσουμε να περιμένουμε. Α1, α2, α1, α2. Έχετε και ένα στατό 3. Ένα στατό. Βάλτε το εκεί πέρα. 4, 5 και 6. Δώστε και το 6. Όπως βλέπετε, αυτά τα επεντόρφη είναι πιο μικρά από τα άλλα, γιατί γίνονται σε πολύ μικρότερα σωλινάκια, για να ενσωματώνονται και στο μηχάνημα της PCR και να παίρνουν πιο γρήγορα τη θερμοκρασία που θέλουμε από την πλάκα. Τώρα, έχετε το χαρτί, δεν το έχετε? Τι χρειάζεται να βάλουμε στο PCR? Δεν το συζητήσαμε, αλλά το ξέρετε. Θέλετε πρώτα απ' όλα το νερό. Το μπάφερ, το οποίο έχει... Εδώ λίγο προσέξτε να τελειώνουμε. Τα κατάλληλα ρυθμιστικά διαλύματα είναι. Τώρα, ανάλογα με την πολυμεράση και την εταιρεία, μπορεί να είναι και διαφορετικό το μπάφερ. Και έχει σημασία. Δεν υπάρχει μόνο μια τακ πολυμεράση. Υπάρχουν πολυμεράσεις διάφορες, που ανάλογο βέβαια και το τι πληρώνεις, παίρνεις καλύτερο αποτέλεσμα. Εδώ πέρα έχει σημασία. Δηλαδή, άμα πληρώσεις πολλά χρήματα, θα πάρεις μια τέλεια πολυμεράση που θα σου δουλεύει ακόμα και σε δύσκολα υποστρώματα. Γι' αυτό, όταν κάποια φορά δεν δουλεύει και το PCR σου, μπορεί κάποια στιγμή να αγοράσεις μια άλλη πολυμεράση, που είναι πιο ακριβή, για να σου δουλέψει, εντάξει. Τι βλέπετε εδώ πέρα, ότι το μπάφερ γράφει μέσα 10 ep. Το βλέπετε, το βλέπετε. Ποιος μπορεί να μου πει πόσος είναι ο συνολικός οκοσταντήτρες που θα κάνουμε. Χωρίς να κάνει το άθροισμα. 25. 25. Ο Γιώργος ξέρει από αραιώσεις, φάνηκε. Εντάξει, γιατί είναι 25, γιατί όταν σου λέει ότι το μπάφερ είναι 10 ep και εσύ βάζεις 2,5 μικρόλυτρα, άρα αυτό θα πάει σε συνολικό οκο 25. 1 προς 10, 2,5. Τώρα βέβαια, να σας μπερδέψω λίγο, γιατί τώρα θα μπερδευτείτε, μόλις ανακάλυψα ότι το μπάφερ της ηλεκτροφόρεσης μου είναι 5 ep. Άρα πόση ποσότητα μπάφερ πρέπει να βάλουμε για 25 μικρόλυτρα συνολική αντίδραση. Μην το πεις, Γιώργος, το πει κανένας άλλος. Πέντε. Άρα διορθώστε εκεί που λέει 2,5 και κάνετε το 5. Και τι άλλο θα αλλάξει. Και το νερό. Αντί να βάλουμε 15,5, πόσο πρέπει να βάλουμε. Εδώ σας θέλω. 13, αφού βάλαμε, θέλουμε ο συνολικός όγκος της αντίδρασης να είναι 25. Εμείς βάλαμε περισσότερο χλωριούχο μαγνύσιο στις 2,5, αυτά τα μειών 2,5 που θα τα αφαιρέσουμε από το νερό. Άρα 13 μικρόλυτρα νερό. Έγινε. Δεν θυμάμαι τι λέει στις μειώσεις. Τα υπόλοιπα δεν αλλάζουν. Εσύ υπολογίζεις όχι έως προς το νερό αλλά προς το συνολικό όγκο. Έγινε. Βάζουμε χλωριούχο μαγνύσιο. Η συγκεκριμένη πολυμεράση, το μπάφερ της, δεν έχει μέσα χλωριούχο μαγνύσιο. Κάποιες φορές μπερδεύεστε, γιατί μπορεί να έχει και το μπάφερ χλωριούχο μαγνύσιο. Δεν μας ενδιαφέρει. Θα βάλουμε DNTP, θα βάλουμε τους εκινητές, θα βάλουμε και την πολυμεράση. Όλα αυτά είναι εδώ πέρα με εξαίρεσε την πολυμεράση, η οποία η πολυμεράση, επειδή είναι μισό μικρόλυτρο και είναι και ακριβή, δεν θα τη βάλετε εσείς, θα τη βάλουμε εμείς στο τέλος. Εντάξει. Αυτό. Άρα, τι θέλω. Έχετε να βάλετε αυτά. Εδώ είναι ό,τι χρειάζεστε. Το DNA σας το έχετε. Εδώ είναι οι πιπέτες σας. Άρα, το DNA υπάρχει ήδη εδώ πέρα. Ναι. Εκεί μέσα θα τα κάνετε όλα. Ναι. Άρα, έρχεστε, τα βάζετε με τη σειρά αυτά. Από πού θέλουμε να ξεκινήσουμε, από την ομάδα 1 ή από την ομάδα 6. Ναι. Τι είναι τα DNA, πείτε. Ερώτηση πρώτα. Τι είναι τα DNA, πείτε. Ποιος θα πει στην Αλεξάνδρα. Τι είναι τα DNA, πείτε. Τα νουκλωτήδια, τα οποία προσθέτει πολυμερά στο υπόστρομά μας. Λοιπόν, θα ξεκινήσω από τη μία μοναδική κυρία, που είναι μόνη. Εντάξει. Είναι μία μετά τέσσερις, μετά τρεις, μετά μία, μετά δύο, μετά τρεις. Αν το πούμε έτσι, τώρα θα ξεκινήσουμε από εκεί. Την άλλη φορά θα ξεκινήσουμε από εσάς, εντάξει. Ό,τι θέλεις, ναι. Είπατε ότι αυτό πρέπει να βγαίνει... Σ' 25. Μαζί με το DNA 25. Ναι, μαζί με το DNA βγαίνει 25. Εντάξει. Μπορείτε να βγείτε έξω εσείς. Άρα, άμα θες κάποια βοήθεια, ζήτα και βοήθεια. Έχεις τα tips εδώ. Έξι, είκοσι, πεντάρα, εικοσάρα πιπέτα. Πού είναι να... Δεν έχω. Δεν έχεις, είτε αυτές είναι είκοσι, είκοσι, αυτή είναι δεκάρα. Θα σου βρω μια εικοσάρα. Περίμενε λίγο. Έλα. Λοιπόν, έξι, εικοσάρα πιπέτα για το 13. Και έχεις και την άλλη πιπέτα από το 1 μέχρι το 10. Από το μισό μέχρι το 10 για όλα τα υπόλοιπα. Εκτός από την πολυμεράση που θα την βάλω εγώ. Έγινε, άρα. Κάποιος να σε βοηθήσει να βάλεις το νερό. Μετά το μπάφερ. Μετά το χλωριούχο μαγνύσιο. Μετά τους... τα DNTPs. Μετά τους εγκινητές. Έγινε. Κάποιος να σε βοηθήσει. Να. Για να τσεκάρετε το τι έχεις βάλει, ας πούμε. Πού είναι το στατό σου, εκείνο το μικρό το στατό. Το μπλε κόκκινο τι ήτανε. Οπότε να το βάζεις εδώ πέρα να μην χρειάζεται συνεχώς να το κρατάς. Δεκατρία. Αλλάξε το λίγο και εδώ πέρα. Στάσου λίγο, να μην μπερδεύεσαι. Δεκατρία και πέντε. Εντάξει. Με τη σειρά σας τα έχω βάλει εκεί πέρα. Το πρώτο εκείνο είναι. Injection water, κάτι τέτοιο λέει. Και παγώσει. Παγωμένο είναι ακόμα. Συνδέωση με αυτή τη σειρά τα βάζουμε. Τώρα βέβαια σκεφτείτε ότι εσείς ετοιμάζετε το κάθε διάλειμμα ξεχωριστά για το κάθε δείγμα. Συνήθως τι κάνουμε. Θα μπορέσει να πάρεις. Δεν είναι πρακτικό να ετοιμάζεις για κάθε αντίδραση ξεχωριστά τα υλικά. Άμα έχεις 30 δείγματα, δεν θα καθίσεις να την κάνεις αυτή τη δουλειά για το κάθε ένα δείγμα ξεχωριστά. Τι ετοιμάζεις, ένα συνολικό reaction buffer όπου θα βάλεις τα πάντα εκτός από DNA. Θα τα υπολογίσεις τα πάντα επί 30. Και μετά θα είσαι 25, μη είναι το ένα μικρόλυτρο DNA 24. Θα πρέπει σε όλα μετά και στα 30 σολυνάκια. Αφού τα ετοιμάσεις όλα και τα κάνεις σε ένα mix, θα τα μοιράσεις σαν 24 μικρόλυτρα παντού. Εντάξει. Δεν έχουμε μικρά, πώς δεν έχουμε μικρά. Καλύτερα να χρησιμοποιείς μόνο την κόκκινη πιπέτα, όχι αυτή. Αυτή είναι μόνο για το 13. Τα υπόλοιπα με αυτήν... Ε, εντάξει. Μετά, στο τέλος. Επανελαμβάνω, πολυμεράσεις θα βάλετε εσείς, θα βάλουμε εμείς στο τέλος. Ένα μικρόλυτρο DNA υπάρχει εκεί μέσα, το γράφω εκεί πέρα. Κι αυτό είναι παγωμένο, μην πειράζει. Κανονικά δεν θα έπρεπε, αλλά εντάξει. Πώς πάει η ελεκτροφόρηση, κύριε Γραμματέα. Έχει προχωρήσει λίγο. Έχει προχωρήσει λίγο. Λοιπόν, τώρα έβαλες νερό, μπαφέρ, χλωριούχο μαγνίσιο, διεντυπείς και τώρα βάζεις στους κινητές. Δεν πειράζει. Και αυτό παγωμένο είναι βασικά. Εφού σκενούσατε ότι είναι λίγο παγωμένο. Έβαλες και το τελευταίο τον κινητή. Λοιπόν, τώρα το μόνο που σημαίνει πια είναι η πολυμεράση, την οποία θα τη βάλουμε μετά εμείς. Εσύ τελείωσες. Κλείνεις, το βάζεις στον πάγο. Όλα πρέπει να γίνονται στον πάγο για να μην χαλάσουν τα διάφορα. Και είμαστε έτοιμοι για τον επόμενο. Λίγο να πούμε πέντε πράγματα. Σε αυτή τη φωτογραφία που έχετε, έχετε βάλει ένα γονιδιωματικό DNA, το οποίο είναι το πρότυπο. Αυτό φαίνεται ότι έχει πολύ υψηλό μεγαλομωριακό DNA. Υπάρχει και ο lander. Αυτά τα δύο φαίνονται. Με πολύ πολύ αχνή ζώνη που δεν φαίνεται στη φωτογραφία που έχετε βγάλει. Στο ένα από τα δείγματα, είχε λίγη αχνή ποσότητα DNA. Αλλά δεν φαίνεται έτσι κι αλλιώς αυτό στη φωτογραφία που έχετε. Αυτό. Γενικά δεν δούλεψε καλά. Μπορεί να φταίει και το κοίτο όμως. Δεν απαραίτητον να φταίτε εσείς. Έγινε. Οπότε, εγώ έτσι κι αλλιώς, σας έβαλα άλλο DNA για να κάνετε PCR. Γιατί αφού δεν είχατε DNA, άμα δεν έχετε DNA, πόσο δουλέψε το PCR σας. Σας έβαλα έτοιμο PCR. Έτοιμο DNA. Λάθος. Άμα βάλεις PCR με DNA που δεν υπάρχει, τι PCR θα πάρεις. Ή θα έπρεπε να ξανακάνουμε απομόνηση DNA από την αρχή. Δεν γίνεται αυτό. Εντάξει. Δεν έπρεπε να σας το πω. Έγινε. Λοιπόν, αυτό τέλειο. Στέλλα, για λίγο να πάρω την πολυμενά σου. Θες να λες τι κάνεις. Βάζω το τελικό διάλειμμα που απαιτείται προκειμένου να γίνει η διαδικασία της PCR. Και είναι η πολυμερά σου. Βάζω σε όλα τα δείγματα. Βάζω σε όλα τα δείγματα. Από μητέμπετ μικρόλυτρα. Από μητέμπετ μικρόλυτρα. Στη συνέχεια. Βάλαμε πάρα πολύ μέσα. Θα κλείνω όλα. Και κάνω ένα σπιν για να πέσουν κάτι τα σταγωνίδια. Θα τα παίρνω στο μηχάνημα της PCR. Θα τα βάζω στα δύο πηγαδάκια. Κλείνω το καπάκι. Και αυτό εδώ είναι το πρόγραμμα με το οποίο θα πραγματοποιηθεί η ενίσχυση του DNA. Αποτελείται από διάφορα στάδια. Όπως ανέφερε και ο κύριος Τριανταφυλίδης θεωρητικά. Και είναι διαφορετικές θερμοκρασίες. Όπου έχουμε δώσει εντολή στο μηχάνημα. Όταν φτάσει στο στάδιο 2 να ξαναγυρίσει... Συγγνώμη, στο στάδιο 5 να ξαναγυρίσει στο 2 και να το κάνει αυτό 32 φορές. Εντάξει, λοιπόν. Και πατάω start για να ξεκινήσει το πρόγραμμα. Το πρόγραμμα έχει ξεκινήσει και θα μου δώσει... Συνολικά θα κρατήσει 2,5 ώρες.